EN
ХПТ-ийн баганын ажиллах чадварын үндсэн элементүүдийг ойлгох
Өндөр ач холбогдолтой шингэн хроматографи ( ХВСА ) нь аналитик хими дахь томоохон шинэлэг бүтээл бөгөөд баганын үр ашигт ажиллагаа нь онцгой тусгайлах процессын үндэс суурь болдог. ХПТ-ийн баганын үр ашигт ажиллагаа болон олон ажиллагааны параметрүүдийн хоорондох нарийн холбоо нь аналитик үр дүнгийн чанарыг тодорхойлдог. Таны хроматографийн туршлага хичнээн ч байсан эдгээр хүчин зүйлсийг эзэмших нь хамгийн сайн тусгайлах ажиллагааг хийхэд маш чухал юм.
HPLC баганын үр ашигтай ажиллагааны ард байгаа шинжлэх ухаан нь урсгалах фаз, тогтвортой фаз болон шинжлэх бодисуудийн хоорондох нарийн нийцэлтийн үр дүн юм. Эдгээр элементүүд зэрэг ажиллавал нарийн тодорхой пикүүдийг үүсгэж, нэгдлүүдийг нарийн тодорхойлох болон таних боломжийг олгодог. Гэсэн хэдий ч ажиллаж буй нөхцөлд бага зэрэг өөрчлөлт орсон ч чанарын ялгааг хүчтэй нөлөөлдөг.
Урсгалах фазын параметрүүд болон тэдгээрийн нөлөө
Урсгалын хурдыг оновчтой болгох
Урсгалах фазын урсгалын хурд нь массыг шилжүүлэх болон диффузын процессын дагуу HPLC баганын үр ашигтай ажиллагаанд шууд нөлөөлдөг. Хэт өндөр урсгалын хурд нь полосын өргөжилт, нарийсалт буурахад хүргэж болох ба хэт удаан урсгалын хурд нь шинжилгээний хугацаа урт байх болон пик диффузитай байхад хүргэж болно. Оновчтой урсгалын хурдыг баганын хэмжээ, жижиг хэсгийн хэмжээ болон шинжлэх бодисын шинж чанарыг анхааралтай авч үзэх шаардлагатай.
Орчин үеийн ВЭСТ систем нь стандарт аналитик колоннуудын хувьд ерөнхийдөө 0.1-2.0 мл/мин хурдны мужид нарийн шахалтын хяналтыг зохион бүтээдэг. Ван Демтерийн муруй нь оптималь шахалтын хурдыг тодорхойлох чухал хэрэгсэл бөгөөд энэ үед табагатай өндөр нь хамгийн сайн тэнцвэрийг төлөөлдөг ба энэ нь баганын өргөжилтийн үр дагавар байна.
Уусгагчийн найрлага өөрчлөлтийн нөлөө
Мобил фазын найрлага нь сонгомол байдлын болон барих чадварын нөлөөгөөр ВЭСТ колонны үр ашигт чанарыг ихэд нөлөөлдөг. Органик нэмэлт бодис, рН зохицуулагч, буферийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг зөв сонгох нь пик хэлбэрийг сайжруулах, шийдлийг тодруулахад маш их нөлөө үзүүлдэг. Уусгагчийн вискозити болон гадаргын таталцлын хүч нь нийт тусгаарлах үр ашигт чанарт чухал нөлөө үзүүлдэг.
Уусгагчийн найрлагыг оновчлох үед шалгах бодис болон тогтвортой фазын химийн шинж чанарыг авч үзэх хэрэгтэй. Тусгаарлах шаардлагатай уусгагчийн хүчийг тохируулах нь пик хэлбэрийн бүтцийг хадгалсаар барих хугацааг оновчлоход тусалдаг.
Баганын физик ба химийн шинж чанар
Бөөмсийн хэмжээ ба хэлбэр
Тогтмол фазын бөөмсийн хэмжээ ба хэлбэр нь HPLC баганын үр дүнтэй ажиллах чадварыг шууд нөлөөлдөг. Жижиг бөөмс нь диффузын замыг багасгаж, массын шилжилтийн кинетикийг сайжруулдаг тул ерөнхийдөө илүү сайн үр дүн өгдөг. Орчин үеийн баганууд нь ихэвчлэн 2 мкм-ээс бага бөөмсийг ашигладаг бөгөөд энэ нь тусгай тусгаарлалтын гүйцэтгэлийг сайжруулдаг ч гэсэн урд талын даралтын шаардлагыг нэмэгдүүлдэг.
Бөөмсийн хэлбэр дүрс нь бүхэлдээ нүхтэй эсвэл гадаад талаасаа нүхтэй байдал нь баганын ачаалал тэсвэрлэх чадвар ба тусгаарлалтын хурдад нөлөөлдөг. Зүрх-гишүүн бөөмс нь сайн үр дүн үзүүлэх чадвартай бөгөөд ажиллагааны даралтыг хэвийн түвшинд байлгаж чаддаг тул энэ төрлийн бөөмс орчин үед ихээр ашиглагддаг.
Баганын хэмжээ ба тохируулга
ХДТ-н колонны физик хэмжээ нь урт, дотоод диаметр, багцлагдсан бүрдэл нягтыг багтаадаг бөгөөд энэ нь шүүлийн үр дүнд шууд нөлөөлдөг. Илүү урт колоннууд нь ихэвчлэн нарийвчлалыг сайжруулдаг боловч шинжилгээний цаг хугацаа болон даралтыг нэмэгдүүлдэг. Колонны дотоод диаметр нь түүврийн ачаалал болон мэдрэг чанарт нөлөөлдөг бөгөөд нарийн колоннууд нь ерөнхийдөө илүү сайн концентрацын мэдрэг чанарыг олгоно.
Колонны тохируулгыг түүврийн нарийслын зэрэг, шаардлагатай нарийвчлал, шинжилгээний хугацааны хязгаар зэрэг хүчин зүйлсийг харгалзан шинжилгээний шаардлагатай тохируулах ёстой. Орчин үеийн колонны технологи нь уламжлалт форматуудаас эхлээд монолит болон микро-борын колоннууд хүртэлх олон сонголтыг санал болгодог.
Температур ба даралтын хүчин зүйлс
Температурын хяналт болон тогтвортой байдал
Хүчилтэй шингэний хроматографийн колонны үр ашигт байдалд температур чухал үүрэг гүйцэтгэдэг бөгөөд энэ нь уусгагчийн зуурмаг чанар, диффузын хурд, бодис шингэн фазын харилцан үйлчлэлийг нөлөөлдөг. Нарийн температурын удирдлагын хяналт нь давтагдах боломжтой байлгах, тогтмол оргил хэлбэртэй байхыг харуулдаг. Их температур нь уусгагчийн зуурмаг чанарыг бууруулж, массын шилжилтийн кинетикийг сайжруулж колонны үр ашигт байдалд эерэг нөлөө үзүүлдэг.
Гэсэн хэдий ч колонн доторх термал градиентийг урьдчилан сэргийлэхийн тулд температурыг анхааралтай хянах шаардлагатай, энэ нь полосны өргөжилтэнд хүргэдэг. Орчин үеийн HPLC системүүд нь шинжилгээний явцад колонны тогтвортой байдалд барихын тулд хөгжилтэй температурын хяналтын механизмыг агуулдаг.
Системийн даралтын удирдлага
Ажиллах даралт нь урсгалах фазын шахагдах ба үрэлтийн халалтаар ХБСШ баганын үр ашигт үзүүлэлтэнд нөлөөлдөг. Хэт өндөр даралт нь баганын орцын шахагдах ба үр ашиг буурахад хүргэх бол, даралтын дутагдал нь муу пиктийн хэлбэр, хангалтгүй шийдэлд нөлөөлж болно. Баганын болон системийн даралтын хязгаарыг ойлгох нь урт хугацааны ажиллагааг хангахад чухал юм.
Системийн даралтыг үнэн зөв хянах нь баганын бохирдол эсвэл байдал муудах зэрэг асуудлыг илрүүлэхэд тусалдаг. Тохиромжтой урьдчилан сэргийлэх арчилгааны арга хэмжээ авч хэрэгжүүлснээр ХБСШ баганын үр ашигтай байдал нь хугацааны турш тогтвортой байна.
Түүвэрт хамаарах хүчин зүйлс
Түүврийн эзлэхүүнийг оновчлох
Түгээсэн дээжний эзлэхүүн ба концентраци нь HPLC баганын үр ашигт үр дүнд ихээр нөлөөлдөг. Хэт их дээжний эзлэхүүн эсвэл концентрациар баганыг давж түгээх нь оройн өргөсөлт ба муу нарийвчлалд амьдрана. Оновчтой түгээлтийн эзлэхүүн нь баганы хоосон эзлэхүүний харьцангуй бага хэсэг болох бөгөөд ерөнхийдөө 1%-аас бага байдаг.
Дээжний уусгагчийн хүч нь хөдөлгөөнт фазтай тэнцүү эсвэл сул байх ёстой бөгөөд оройн дүрс алдагдахаас сэргийлнэ. Нийлмэл матрикс дээр ажиллах үед дээжийг боловсруулах аргууд болох шингэлт эсвэл цэвэрлэгээ хийх нь баганын үр ашигт чанарыг хадгалахад шаардлагатай байж болно.
Дээжний матриксын нөлөө
Дээжний матриксын бүрэлдэхүүн нь ион дарангуйлалт, матриксийн нөлөөгөөр оройн өргөсөлт, баган цагаан өнгөрөх зэрэг механизмуудын дагуу HPLC баганын үр ашигт чанарыг ихээр нөлөөлдөг. Тохирох дээж боловсруулалт ба матрикс тохируулга хийх нь эдгээр нөлөөг багасгаж, тогтвортой ялгавч ажиллагааг хадгалахад тусалдаг.
Шүүлтүүр, экстракц, эсвэл хатуу фазын экстракцын зэрэг тохиромжтой загварын цэвэрлэх аргыг хэрэглэх нь колонны ажиллах хугацааг хамгаалах, тусгайлан боловсруулах чадварыг бэхжүүлэхэд тусална. Нийлмэл сорьцтой ажиллах үед колонныг регуляр цэвэрлэх, сэргээх ажилд хэрэгтэй байж болно.
Ихэнх асуултууд
PH нь HPLC колонны үр ашигт чанарт яаж нөлөөлөх вэ?
pH нь HPLC колонны үр ашигт чанарт шинжилгээний иончлолын төлөв, мөн тогтвортой фазтай харилцан үйлчлэлээр нөлөөлнө. Тохиромжтой pH-ийн удирдлага нь баталгаатай байлгахыг хангана. Хамгийн сайн үр дүнгийн тулд колонны техникийн үзүүлэлтээр тодорхойлогдсон pH мужийн дагуу барьж, бүрэн буферийн системийг ашиглан шүүлтүүрийн туршид pH тогтвортой байдалд хангамжийг хийх хэрэгтэй.
Колонны үр ашигт чанар буурч байгааны шинж тэмдэгүүд юу вэ?
ХРХ баганын үр ашиг буурахын ерөнхий шинжүүдэд пикүүдийн дээд талын өсөлт, пикүүдийн хоорондох нарийцалт буурах, арын даралт ихсэх, тавцангуудын тоо буурах зэрэг хамаарна. Системийн тохирох туршилтын үр дүнгээр эдгээр үзүүлэлтүүдийг байнга хянах нь баганын ажиллагааны асуудлыг цаг тухайд нь илрүүлэх, засвар үйлчилгээг цагт нь хийх боломжийг олгодог.
Үр ашигийг нь байлгаж баганын амьдралыг яаж сунгах вэ?
ХРХ баганын амьдралыг сунгаж, үр ашигтай байлгахын тулд зохистой дээж бэлтгэх арга хэмжээнүүдийг хэрэгжүүлэх, өндөр чанартай уусгагчид ашиглах, хадгалах нөхцөлийг сахих, үйлчилгээний хүрээний цэвэрлэх, сэргээх арга хэмжээг дагах шаардлагатай. Байнгын урьдчилан сэргийлэх засварын ажил, ажиллаж буй нөхцөлийг анхааралтай хянах нь цаг хугацааны турш тогтвортой ажиллагааг баталгаажуулдаг.