ຄ່າຈຸດຕັດນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ (MWCO) ແມ່ນຫຍັງທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດສຳລັບທໍ່ການກົງກິນແບບອັດຕະລະດັບສູງຂອງທ່ານ?

ການເລືອກຄ່າຕັດອອກຂອງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນທີ່ເໝາະສົມສຳລັບທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕະໂນມັດ (ultrafiltration) ຂອງທ່ານ ແມ່ນການμຕັດສິນໃຈທີ່ສຳຄັນຢ່າງຍິ່ງ ເຊິ່ງມີຜົນກະທົບໂດຍກົງຕໍ່ຄວາມສຳເລັດຂອງການເຂັ້ມຂຸ້ນປະຕິກິລິຍາ, ການປ່ຽນແປງສະພາບແວດລ້ອມ (buffer exchange), ຫຼື ຂະບວນການກຽມຕົວຢ່າງ. ຄ່າ MWCO (Molecular Weight Cut-Off) ກຳນົດວ່າໂມເລກຸນໃດຈະຜ່ານເຂົ້າໄປໃນເມັມເບຣນ ແລະ ໃດທີ່ຈະຖືກກັ້ນໄວ້, ເຮັດໃຫ້ມັນເປັນຂໍ້ກຳນົດທີ່ສຳຄັນທີ່ສຸດອັນດຽວທີ່ຕ້ອງພິຈາລະນາເວລາເລືອກທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕະໂນມັດສຳລັບການນຳໃຊ້ໃນຫ້ອງທົດລອງຂອງທ່ານ. ການເຂົ້າໃຈວິທີການຈັບຄູ່ຄ່າ MWCO ກັບຂະໜາດຂອງໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍ, ຂໍ້ກຳນົດດ້ານຄວາມບໍ່ປົນເປື້ອນ (purity requirements), ແລະ ຄວາມຕ້ອງການສຳລັບການວິເຄາະຕໍ່ໄປ (downstream analysis) ຈະຮັບປະກັນໃຫ້ໄດ້ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີທີ່ສຸດ, ການສູນເສຍຕົວຢ່າງທີ່ໜ້ອຍທີ່ສຸດ, ແລະ ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ ແລະ ສາມາດທົດສອບຄືນໄດ້ຢ່າງເປັນລຳດັບໃນຂະບວນການຄົ້ນຄວ້າ ຫຼື ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບຂອງທ່ານ.

MWCO ທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດສຳລັບທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕະໂນມັດຂອງທ່ານ ຂຶ້ນກັບນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງສານທີ່ທ່ານຕ້ອງການວິເຄາະ, ປະກອບສ່ວນຂອງຕົວຢ່າງຂອງທ່ານ, ແລະ ເປົ້າໝາຍທີ່ເຈາະຈົງຂອງຂະບວນການກັ້ນຂອງທ່ານ. ເຖິງແມ່ນວ່າຈະມີຄຳແນະນຳທົ່ວໄປຢູ່, ການເລືອກ MWCO ທີ່ສຳເລັດຜົນຈະຕ້ອງອີງໃສ່ການເຂົ້າໃຈຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງຂະໜາດຮູຂອງເມືອງ, ການກັ້ນສານເປົ້າໝາຍ, ແລະ ປະສິດທິພາບໃນການກຳຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນ. ບົດຄວາມນີ້ຈະໃຫ້ບ່ອນທີ່ເປັນລະບົບສຳລັບການກຳນົດ MWCO ທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດສຳລັບການນຳໃຊ້ທີ່ເຈາະຈົງຂອງທ່ານ, ລວມເຖິງຫຼັກການພື້ນຖານຂອງຄວາມເລືອກເອົາຂອງເມືອງ, ຂໍ້ຄວນພິຈາລະນາໃນການເລືອກເອົາຢ່າງເປັນຮູບປະທຳສຳລັບປະເພດທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງຊີວະໂມເລກຸນ, ແລະ ວິທີແກ້ໄຂບັນຫາເມື່ອວິທີການທົ່ວໄປບໍ່ໃຫ້ຜົນໄດ້ດັ່ງທີ່ຄາດຫວັງ.

ການເຂົ້າໃຈ MWCO ແລະບົດບາດຂອງມັນໃນປະສິດທິພາບຂອງການກັ້ນແບບອັດຕະໂນມັດ

ການກຳນົດນ້ຳໜັກໂມເລກຸນທີ່ຖືກຕັດອອກໃນຮູບແບບທີ່ເປັນປະຈັກ

ຄ່າຈຸດຕັດນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ (MWCO) ຂອງທໍ່ການກົງກິນ (ultrafiltration) ແທນຄ່ານ້ຳໜັກໂມເລກຸນທີ່ກຳນົດໄວ້ເປັນທາງການ ເຊິ່ງປະມານ 90% ຂອງສານທີ່ຖືກລະລາຍ (solute) ທີ່ມີຂະໜາດໂມເລກຸນເປັນເພງໆ ຈະຖືກກັ້ນໄວ້ໂດຍເມືອງ (membrane) ໃນເວລາທີ່ໃຊ້ເຄື່ອງແບ່ງຊັ້ນດ້ວຍການປັ່ນ (centrifugation). ຄຸນລັກສະນະນີ້ ມັກຖືກສະແດງເປັນ ດາລ໌ຕັນ (Daltons) ຫຼື ກິໂລດາລ໌ຕັນ (kilodaltons) ແລະ ເຮັດໜ້າທີ່ເປັນຄຳແນະນຳຫຼື ຄູ່ມື ແທນທີ່ຈະເປັນຂອບເຂດທີ່ແນ່ນອນ. MWCO ບໍ່ໄດ້ສະແດງເຖິງຈຸດຕັດທີ່ຊັດເຈນ ແຕ່ເປັນໄລຍະໆທີ່ປະສິດທິຜົນໃນການກັ້ນຈະຫຼຸດລົງຢ່າງຊ້າໆ. ຜູ້ຜະລິດຈະກຳນົດຄ່າ MWCO ໂດຍໃຊ້ມາດຕະຖານຂອງໂປຣຕີນທີ່ມີຮູບຮ່າງກົມ (globular protein) ໃນເງື່ອນໄຂການທົດສອບທີ່ກຳນົດໄວ້ຢ່າງຊັດເຈນ, ສິ່ງນີ້ໝາຍຄວາມວ່າ ປະສິດທິຜົນທີ່ແທ້ຈິງໃນການກັ້ນອາດຈະແຕກຕ່າງໄປຕາມຮູບຮ່າງ, ປະຈຸບັນ (charge), ແລະ ຄວາມຍືດຫຸ່ນ (flexibility) ຂອງໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍທີ່ທ່ານກຳລັງເປົ້າໝາຍ.

ເມື່ອເຮັດວຽກກັບທໍ່ການກົງແຜ່ນເຊີນ (ultrafiltration tube) ຂະໜາດຂອງຮູໃນແຜ່ນເຊີນຈະສຳພັນໂດຍກົງກັບຄ່າ MWCO ທີ່ລະບຸໄວ້ ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ເກີດເປັນອຸປະກອນກັ້ນທີ່ອີງຕາມຂະໜາດ (size-exclusion barrier) ເພື່ອໃຫ້ໂມເລກຸນທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍກວ່າລວມທັງຜ່ານໄດ້ ແຕ່ຈະເຮັດໃຫ້ໂມເລກຸນທີ່ມີຂະໜາດໃຫຍ່ກວ່າຖືກເຂັ້ມຂຶ້ນໃນສ່ວນທີ່ຄ້າງຢູ່ (retentate). ຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງຂະໜາດຮູໃນແຜ່ນເຊີນ ແລະ ຄ່າ MWCO ນີ້ບໍ່ແມ່ນເສັ້ນຕັ້ງເນື່ອງຈາກການກັ້ນໂມເລກຸນຂຶ້ນກັບ ຮັດສະໝີຂອງໂມເລກຸນໃນທາງໄຫຼ (hydrodynamic radius) ຫຼາຍກວ່າເປັນພຽງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນເທົ່ານັ້ນ. ໂມເລກຸນທີ່ມີຮູບຮ່າງຍາວ ຫຼື ມີຄວາມຍືດຫຼຸ່ນສາມາດຜ່ານແຜ່ນເຊີນໄດ້ງ່າຍກວ່າໂມເລກຸນທີ່ມີຮູບຮ່າງກົມແລະຄ່ານ້ຳໜັກໂມເລກຸນຄືກັນ. ຄວາມແຕກຕ່າງນີ້ເປັນເຫດຜົນທີ່ເຮັດໃຫ້ການທົດສອບດ້ວຍການທົດລອງ (empirical testing) ມີຄວາມຈຳເປັນໃນບາງຄັ້ງເພື່ອຢືນຢັນວ່າຄ່າ MWCO ທີ່ເລືອກນັ້ນສາມາດກັ້ນໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍທີ່ເຈົ້າຕ້ອງການໄດ້ຢ່າງເໝາະສົມ ໃນຕົວຢ່າງທີ່ເຈົ້າກຳລັງວິເຄາະ.

ວັດຖຸທີ່ໃຊ້ເຮັດແຜ່ນເຊີນ ແລະ ຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຄ່າ MWCO

ວັດສະດຸທີ່ໃຊ້ເຮັດເຍື່ອໃນທໍ່ການກົງກິນທີ່ທ່ານໃຊ້ມີຜົນຕໍ່ຄວາມຖືກຕ້ອງ ແລະ ຄວາມສອດຄ່ອງຂອງປະສິດທິພາບ MWCO ໂດຍກົງ. ເຍື່ອເຊລູໂລສທີ່ຖືກຟື້ນຟູໃໝ່ມີຄວາມສາມາດຈັບເປົ້າປະເພດໂປຣຕີນຕ່ຳ ແລະ ການແຈກຢາຍຂອງຂະໜາດຮູທີ່ສອດຄ່ອງ, ເຮັດໃຫ້ເຫມາະສຳລັບການນຳໃຊ້ທີ່ຕ້ອງການອັດຕາການດຶງຄືນສູງ ແລະ ລັກສະນະການກັ້ນທີ່ຄາດໄດ້. ເຍື່ອ polyethersulfone ມີຄວາມຕ້ານທານທາງເຄມີທີ່ດີເລີດ ແລະ ອັດຕາການໄຫຼທີ່ໄວຂຶ້ນ, ແຕ່ອາດຈະມີການຈັບເປົ້າປະເພດໂປຣຕີນທີ່ສູງຂຶ້ນເລັກນ້ອຍໃນບາງການນຳໃຊ້. ຂະບວນການຜະລິດ ແລະ ມາດຕະຖານການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບທີ່ນຳໃຊ້ໃນການຜະລິດເຍື່ອຈະມີຜົນຕໍ່ການທີ່ເສັ້ນທາງການກັ້ນທີ່ແທ້ຈິງຈະເຂົ້າກັນກັບຂໍ້ກຳນົດ MWCO ທີ່ກຳນົດໄວ້ຢ່າງໃກ້ເຄີຍ.

ຄຸນສົມບັດທາງໆ ຜິວຂອງເມັມເບຣນຍັງມີຜົນຕໍ່ປະສິດທິພາບຂອງ MWCO ໂດຍການສົ່ງຜົນຕໍ່ວິທີທີ່ໂມເລກຸນຈະເຂົ້າຫາ ແລະ ມີປະຕິສຳພັນກັບຮູຂອງເມັມເບຣນ. ເມັມເບຣນທີ່ມີຄຸນສົມບັດດຶດນ້ຳຈະຫຼຸດຜ່ອນການດູດຊືມໂປຟີນ ແລະ ປັບປຸງການກູ້ຄືນ (recovery) ແຕ່ອາດຈະອະນຸຍາດໃຫ້ໂມເລກຸນທີ່ມີຂະໜາດໃຫຍ່ກວ່າໄດ້ຜ່ານໄປໄດ້ຖ້າພວກມັນມີຮູບຮ່າງທີ່ຍືດຍາວ. ຄຸນສົມບັດດ້ານປະຈຸກຂອງເມັມເບຣນສາມາດສ້າງປະຕິສຳພັນທາງໄຟຟ້າທີ່ອາດຈະເຮັດໃຫ້ປະສິດທິພາບໃນການກັກເກັບດີຂຶ້ນ ຫຼື ເລີກຈາກການກັກເກັບຫຼຸດລົງ ຂຶ້ນກັບຂະໜາດຂອງໂມເລກຸນເທົ່ານັ້ນ. ການເຂົ້າໃຈປະຕິບັດຕົວທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງວັດສະດຸເຫຼົ່ານີ້ຈະຊ່ວຍໃຫ້ທ່ານຄາດການໄດ້ວ່າເມື່ອໃດທີ່ກົດເກນທົ່ວໄປໃນການເລືອກ MWCO ອາດຈະຕ້ອງມີການປັບປຸງເພື່ອໃຫ້ເໝາະສົມກັບການນຳໃຊ້ເฉະເພາະຂອງທ່ານ ແລະ ລັກສະນະຂອງໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍ.

ການກຳນົດ MWCO ທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດຕາມຂະໜາດຂອງໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍ

ກົດເກນໜຶ່ງສ່ວນສາມ ເຖິງ ໜຶ່ງສ່ວນສອງ ສຳລັບການເລືອກ MWCO

ຄຳແນະນຳທີ່ຖືກນຳໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງທີ່ສຸດສຳລັບການເລືອກ ທູບ Ultrafiltration MWCO ແມ່ນເພື່ອເລືອກຄ່າຈຸດຕັດທີ່ເປັນໜຶ່ງໃນສາມຫຼືໜຶ່ງໃນສອງຂອງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງປະຕິກິລິຍາທີ່ທ່ານຕ້ອງການ ຫຼື ຊີວະເຄມີ. ວິທີການທີ່ລະມັດລະວັງນີ້ຈະເຮັດໃຫ້ປະສິດທິຜົນໃນການກັກເກັບສູງສຸດ ໃນຂະນະທີ່ຍັງອະນຸຍາດໃຫ້ສິ່ງປົນເປືືອນທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍກວ່າ ແລະ ສ່ວນປະກອບຂອງຕົວແທນໄດ້ຜ່ານໄປຢ່າງມີປະສິດທິຜົນ. ຕົວຢ່າງເຊັ່ນ: ຖ້າທ່ານກຳລັງເຮັດການເຂັ້ມຂຸ້ນປະຕິກິລິຍາທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ 30 ກິໂລດາລ໌ຕັນ, ການເລືອກທໍ່ການກັກເກັບດ້ວຍເທັກໂນໂລຊີ ultrafiltration ທີ່ມີ MWCO 10 ກິໂລດາລ໌ຕັນ ຈະໃຫ້ການກັກເກັບທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ ແລະ ຂັບອອກເກືອ, ເປັບໄຕດ໌ທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍ, ແລະ ສິ່ງປົນເປືືອນອື່ນໆທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຕ່ຳອອກຈາກຕົວຢ່າງຂອງທ່ານຢ່າງມີປະສິດທິຜົນ.

ວິທີການເລືອກທີ່ອີງໃສ່ອັດຕາສ່ວນນີ້ ຄຳນຶງເຖິງຄວາມປ່ຽນແປງຂອງຮູບຮ່າງໂມເລກຸນ ແລະ ລັກສະນະທາງສະຖິຕິຂອງຂໍ້ກຳນົດ MWCO. ໂດຍການເລືອກ MWCO ທີ່ຕ່ຳກວ່ານ້ຳໜັກໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍຂອງທ່ານຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ ທ່ານຈະສ້າງເຂດປອດໄພທີ່ຊົດເຊີຍສຳລັບໂມເລກຸນທີ່ອາດຈະມີຮູບຮ່າງຍືດຍາວ ຫຼື ສຳລັບຄວາມປ່ຽນແປງເລັກນ້ອຍໃນການແຈກຢາຍຂະໜາດຂອງຮູຂອງເມັມເບຣນ. ກົດເກນໜຶ່ງສາມສ່ວນຫຼື ໜຶ່ງສອງສ່ວນເຮັດວຽກໄດ້ດີເປັນພິເສດສຳລັບໂປຟີນທີ່ມີຮູບຮ່າງກົມ (globular proteins) ທີ່ມີໂຄງສ້າງທຸຕິຍະ (tertiary structures) ທີ່ເຂັ້ມແຂງ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ ກົດເກນນີ້ອາດຈະຕ້ອງປັບປຸງເມື່ອເຮັດວຽກກັບໂປຟີນທີ່ຍາວຫຼາຍ, ເປັບໄຕດ໌ທີ່ມີຄວາມຍືດຫຼື ມີຄວາມຍືດຫຼາຍ, ອາຊີດ ນິວເຄີກ (nucleic acids), ຫຼື ໂມເລກຸນທີ່ມີຮູບຮ່າງທີ່ບໍ່ປົກກະຕິ ເຊິ່ງບໍ່ເຂົ້າກັບມາດຕະຖານຂອງໂປຟີນທີ່ກົມທີ່ຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອກຳນົດຄ່າ MWCO.

ການປັບ MWCO ສຳລັບຊີວະໂມເລກຸນທີ່ບໍ່ມີຮູບຮ່າງກົມ

ອາຊີດ ເນື້ອເຍື່ອ (nucleic acids), ເປັບໄຕດ໌ເສັ້ນຕື່ມ (linear peptides), ແລະ ໂປຼຕີນທີ່ບໍ່ມີຮູບຮ່າງຈະຕ້ອງໃຊ້ເຕັກນິກການເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ປັບປຸງແລ້ວ ເນື່ອງຈາກພຶດຕິກຳການເຄື່ອນທີ່ໃນຂະນະທີ່ຢູ່ໃນນ້ຳ (hydrodynamic behavior) ຂອງພວກມັນແຕກຕ່າງຢ່າງມີນັກຈາກໂປຼຕີນທີ່ມີຮູບຮ່າງກົມ (globular proteins). ພວກເສັ້ນດີເອນເອ (DNA) ແລະ ຮີເອນເອ (RNA) ມີຮູບຮ່າງເປັນເສັ້ນຄູ່ (double-helix) ຫຼື ເສັ້ນດຽວ (single-strand) ທີ່ຍືດຍາວອອກ ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ມີຮັດສະມີທາງດ້ານ hydrodynamic ທີ່ໃຫຍ່ກວ່າໂປຼຕີນທີ່ມີຮູບຮ່າງກົມທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນເທົ່າກັນ. ເມື່ອທ່ານຕ້ອງການເຂັ້ມຂຸ້ນອາຊີດ ເນື້ອເຍື່ອ ໂດຍໃຊ້ທໍ່ການກັ້ນຜ່ານເມືອນ (ultrafiltration tube), ທ່ານອາດຈະຕ້ອງເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ເທົ່າກັບ 1/5 ຫຼື 1/10 ຂອງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນເພື່ອໃຫ້ຮັບປະກັນການກັ້ນໄວ້ໄດ້ຢ່າງເໝາະສົມ. ສ່ວນເສັ້ນດີເອນເອທີ່ມີຂະໜາດ 30 kilobase ອາດຈະຕ້ອງໃຊ້ຄ່າ MWCO ທີ່ 3 kilodalton ຫຼື ເຖິງແມ່ນວ່າຈະຕ່ຳກວ່ານີ້ເພື່ອໃຫ້ການເຂັ້ມຂຸ້ນມີປະສິດທິຜົນ, ຂຶ້ນກັບວ່າອາຊີດ ເນື້ອເຍື່ອ ນັ້ນເປັນເສັ້ນຄູ່ (double-stranded), ເສັ້ນດຽວ (single-stranded), ຫຼື ປະກອບຮ່ວມກັບໂປຼຕີນ.

ເປັນເລື່ອງທີ່ງ່າຍຂຶ້ນສຳລັບເປັບໄຕດ໌ທີ່ມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນ ແລະ ສ່ວນຂອງໂປຣຕີນທີ່ບໍ່ມີໂຄງສ້າງທີ່ສະຖຽນໃນລະດັບທີສາມ (tertiary structure) ໃນການຜ່ານເຂົ້າໄປໃນຮູຂອງເມັມເບຣນ ເມື່ອທຽບກັບໂປຣຕີນທີ່ພັບຕົວຢ່າງເຕັມທີ່, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຕ້ອງການຄ່າ MWCO ທີ່ຕ່ຳກວ່າຄ່າແນະນຳທົ່ວໄປ. ມີຄວາມທ້າທາຍເພີ່ມເຕີມເມື່ອເຮັດວຽກກັບ micelles ຂອງ detergent, vesicles ຂອງ lipid, ແລະ ສັງລວມຂອງໂປຣຕີນ ເນື່ອງຈາກຂະໜາດທີ່ແທ້ຈິງຂອງເຫຼົ່ານີ້ຂຶ້ນກັບສະພາບການຂອງການລວມຕົວ (aggregation state) ແລະ ສະພາບຂອງວິທະຍາສາດທີ່ໃຊ້. ອຸນຫະພູມ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ ion, pH, ແລະ ການມີຢູ່ຂອງ chaotropic agents ຫຼື reducing agents ສາມາດປ່ຽນແປງຮູບຮ່າງຂອງໂມເລກຸນ ແລະ ສົ່ງຜົນຕໍ່ການກັ້ນ (retention behavior) ໄດ້ທັງໝົດ. ເມື່ອເຮັດວຽກກັບ biomolecules ທີ່ບໍ່ມີຄວາມທຳມະດາເຫຼົ່ານີ້, ການທົດສອບເບື້ອງຕົ້ນດ້ວຍຄ່າ MWCO ຈຳນວນຫຼາຍມັກຈະຈຳເປັນເພື່ອກຳນົດຄຸນລັກສະນະທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດຂອງທໍ່ ultrafiltration ສຳລັບຄວາມຕ້ອງການໃຊ້ງານທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງທ່ານ.

ຄວາມສັບສົນຂອງຕົວຢ່າງ ແລະ ການພິຈາລະນາກ່ຽວກັບການກຳຈັດສິ່ງປົນເປື້ອນ

ປະກອບຂອງຕົວຢ່າງທີ່ທ່ານໃຊ້ຈະມີຜົນຕໍ່ການເລືອກຄ່າ MWCO ໂດຍການກຳນົດວ່າສິ່ງປົນເປືືອນໃດທີ່ຈຳເປັນຕ້ອງຖືກຂັບອອກ ແລະ ສ່ວນປະກອບໃດທີ່ຈຳເປັນຕ້ອງຮັກສາໄວ້. ເມື່ອເປົ້າໝາຍຫຼັກຂອງທ່ານແມ່ນການຂັບອອກສິ່ງປົນເປືືອນທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຕ່ຳ ເຊັ່ນ: ເກືອ, ສານລ້າງ, ຫຼື ສານຢຸດການເຮັດວຽກທີ່ເປັນໂມເລກຸນນ້ອຍ ໃນຂະນະທີ່ຮັກສາໂປຣຕີນເປົ້າໝາຍໄວ້, ການເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ຕ່ຳຫຼາຍກວ່ານ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງໂປຣຕີນເປົ້າໝາຍຈະຮັບປະກັນການປ່ຽນແທນບັຟເຟີຢ່າງມີປະສິດທິພາບ. ແຕ່ຖ້າຕົວຢ່າງຂອງທ່ານປະກອບດ້ວຍໂປຣຕີນຫຼາຍຊະນິດ ຫຼື ຊີວະໂມເລກຸນອື່ນໆທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຕ່າງກັນ, ການເລືອກຄ່າ MWCO ຈະເປັນການຕົກລົງກັນລະຫວ່າງການຮັກສາສ່ວນປະກອບທີ່ຕ້ອງການ ແລະ ການຂັບອອກສິ່ງທີ່ບໍ່ຕ້ອງການ.

ຕົວຢ່າງຊີວະເຄມີທີ່ສັບສົນເຊັ່ນ: ການສັກເອົາເຊລລ໌, ເຊີຟຸມ, ຫຼື ນ້ຳຢາທີ່ໄດ້ຈາກການເພາະເຊລລ໌ ມີສານເຄມີທີ່ແຕກຕ່າງກັນຫຼາຍຊະນິດ ເຊິ່ງອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການອຸດຕັນເມືອງຂອງເມືອງຫຼືແຂ່ງຂັນກັບການກັກເກັບ. ໃນສະຖານະການເຫຼົ່ານີ້, ຄ່າ MWCO (Molecular Weight Cut-Off) ທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດສຳລັບທ່ອງທີ່ທ່ານໃຊ້ໃນການກັກເກັບດ້ວຍວິທີ ultrafiltration ຈະຕ້ອງສາມາດສະຫຼຸບປະມວນເຖິງປັດໄຈທີ່ແຕກຕ່າງກັນຫຼາຍດ້ານ ເຊັ່ນ: ການກັກເກັບເປົ້າໝາຍ, ການຂັບໄສສິ່ງປົນເປື້ອນອອກ, ຄວາມຕ້ານທານຕໍ່ການອຸດຕັນເມືອງຂອງເມືອງ, ແລະ ເວລາໃນການປຸງແຕ່ງ. ການເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ຕ່ຳເກີນໄປອາດຈະເຮັດໃຫ້ອັດຕາການກັກເກັບຊ້າລົງ ເນື່ອງຈາກຮູຂອງເມືອງຖືກອຸດຕັນດ້ວຍສານທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນກາງ. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ຖ້າເລືອກຄ່າ MWCO ສູງເກີນໄປ ອາດຈະເຮັດໃຫ້ສານເປົ້າໝາຍສູນເສຍໄປເພີຍງສ່ວນໜຶ່ງ ຫຼື ບໍ່ສາມາດຂັບໄສສານທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດການຮີບຮ້ອນອອກໄດ້ຢ່າງເຕັມທີ່. ຂັ້ນຕອນການກັກເກັບລ່ວງໆ, ການເຈືອຈາງຕົວຢ່າງ, ຫຼື ການກັກເກັບຕໍ່ເນື່ອງດ້ວຍທ່ອງທີ່ມີຄ່າ MWCO ຕ່າງກັນອາດຈະຈຳເປັນສຳລັບຕົວຢ່າງທີ່ທ້າທາຍ ໂດຍທີ່ການໃຊ້ທ່ອງທີ່ ultrafiltration ເພີຍງໜຶ່ງຊິ້ນບໍ່ສາມາດບັນລຸເປົ້າໝາຍທັງໝົດຂອງການກັກເກັບໄດ້ໃນເວລາດຽວກັນ.

ຍຸດທະສາດການເລືອກຄ່າ MWCO ຕາມການນຳໃຊ້ເປົ້າໝາຍ

ການເຂັ້ມຂົ້ນປະຕິກິລິຍາທາງຊີວະເคมີ ແລະ ການປ່ຽນແປງບັຟເຟີ

ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງໂປຕີນແທນສຳລັບການນຳໃຊ້ທີ່ຄົງທີ່ທີ່ສຸດສຳລັບເຕັກໂນໂລຢີທໍ່ ultrafiltration, ແລະ ການເລືອກຄ່າ MWCO ຈະກຳນົດປະສິດທິຜົນໃນການເຂັ້ມຂຸ້ນ ແລະ ອັດຕາການດຶງກັບຄືນສຸດທ້າຍໂດຍກົງ. ສຳລັບ antibody monoclonal ແລະ ການຈັດເປັນ immunoglobulin ທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຢູ່ທີ່ປະມານ 150 kilodaltons, ທໍ່ ultrafiltration ທີ່ມີຄ່າ MWCO 30 ຫຼື 50 kilodaltons ຈະໃຫ້ການກັກເກັບທີ່ດີເລີດ ແລະ ຍັງອະນຸຍາດໃຫ້ການປ່ຽນແປງ buffer ໄດ້ຢ່າງໄວວ່າ. ໂປຕີນທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍກວ່າເຊັ່ນ: ເອນໄຊມ໌, cytokines, ຫຼື ປັດໄຈການເຕີບໂຕ (growth factors) ທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຢູ່ໃນໄລຍະ 10 ຫຼື 50 kilodaltons ໂດຍທົ່ວໄປຈະຕ້ອງການເມັມເບຣນທີ່ມີຄ່າ MWCO 10 ຫຼື 3 kilodaltons ຂຶ້ນກັບວ່າຈະຕ້ອງການການກັກເກັບຢ່າງສົມບູນ ຫຼື ຕ້ອງການການແຍກແຍ້ງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຢ່າງເລືອດເລືອກ.

ປະសິດທິຜົນຂອງການແລກປ່ຽນບັຟເຟີຂຶ້ນກັບຄ່າ MWCO ທີ່ໃຫ້ການກັກເກັບທີ່ເໝາະສົມ ໃນເວລາທີ່ຮັກສາອັດຕາການໄຫຼຜ່ານເມັມເບຣນໄດ້ຢ່າງເໝາະສົມ. ຖ້າທໍ່ອຸດົມສູງ (ultrafiltration tube) ມີຄ່າ MWCO ເກີນໄປໃກ້ກັບນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງໂປຼຕີນເປົ້າໝາຍ ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການສູນເສຍໂປຼຕີນເພີ່ມເຕີມຜ່ານເມັມເບຣນ ໂດຍເປັນພິເສດໃນຂະບວນການເຂັ້ມຂັ້ນຂັ້ນສຸດທ້າຍ ເມື່ອຄວາມເຂັ້ມຂັ້ນຂອງໂປຼຕີນໃນສ່ວນທີ່ຖືກກັກເກັບ (retentate) ເພີ່ມຂຶ້ນ. ສ່ວນຖ້າຄ່າ MWCO ຕ່ຳເກີນໄປ ກໍອາດຈະເຮັດໃຫ້ຂະບວນການກົງກັນຂ້າມຊ້າລົງ ແລະ ເພີ່ມຈຳນວນວຟງການເຈືອຈາງ ແລະ ການເຂັ້ມຂັ້ນທີ່ຕ້ອງເຮັດເພື່ອໃຫ້ການແລກປ່ຽນບັຟເຟີສຳເລັດຢ່າງສົມບູນ. ສຳລັບການແລກປ່ຽນບັຟເຟີຂອງໂປຼຕີນສ່ວນຫຼາຍ ການບັນລຸການຫຼຸດລົງຂອງປະລິມານຢ່າງໜ້ອຍສິບເທົ່າ ຈະເຮັດໃຫ້ການປ່ຽນແທນບັຟເຟີເດີມມີປະສິດທິຜົນ ແລະ ຮັກສາການດຶງດູດໂປຼຕີນໄວ້ໄດ້ເຖິງ 95% ຫຼື ສູງກວ່າ ເມື່ອເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ເໝາະສົມ.

ການລົບເກືອອອກ ແລະ ການລົບອານຸພາກຂະໜາດນ້ອຍອອກ

ການຖອດເກື່ອນເກືອ, ນິວຄລີໂອໄທດ, ຕົວກະຕຸ້ນໃຫ້ຫຼຸດລົງ, ຫຼື ອື່ນໆຂອງເຊື້ອສານທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍຈາກຕົວຢ່າງປະກອບດ້ວຍໂປຣຕີນ ຕ້ອງການທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕະລາສູງ (ultrafiltration tube) ທີ່ມີຄ່າ MWCO ເຊິ່ງຮັກສາໂປຣຕີນໄວ້ ແຕ່ອະນຸຍາດໃຫ້ສານປົນເປືືອນຜ່ານໄປໄດ້ຢ່າງເຕັມທີ່. ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນລະຫວ່າງໂປຣຕີນທົ່ວໄປ ແລະ ເຊື້ອສານທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍ ແມ່ນໃຫຍ່ພໍສົມຄວນ ເຮັດໃຫ້ການເລືອກຄ່າ MWCO ແມ່ນຄ່ອນຂ້າງງ່າຍດາຍສຳລັບການຖອດເກື່ອ. ທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕະລາສູງທີ່ມີຄ່າ MWCO ເທົ່າກັບສາມກິໂລດາລ໌ຕັນ ສາມາດຮັກສາໂປຣຕີນທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນເທິງສິບກິໂລດາລ໌ຕັນໄວ້ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ ແລະ ສາມາດຖອດເກື່ອ, ກາເລີຣ໌, ອີມິດາໂຊລ, ແລະ ສ່ວນປະກອບອື່ນໆຂອງບັຟເຟີທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຕ່ຳກວ່າຫ້າຮ້ອຍດາລ໌ຕັນອອກໄດ້ຢ່າງສົມບູນ.

ປະសິດທິຜົນຂອງການລຶບອອກສານເຄມີທີ່ເປັນໂມເລກຸນນ້ອຍແມ່ນຂຶ້ນກັບທັງການເລືອກຕັ້ງຄ່າ MWCO ແລະ ວິທີການລ້າງທີ່ໃຊ້. ການເຮັດວຽກຫຼາຍໆ ຄັ້ງດ້ວຍການເຈືອຈາງແລະການເຂັ້ມຂຸ້ນຈະຊ່ວຍປັບປຸງການລຶບອອກສິ່ງປົນເປືືອນ, ໂດຍແຕ່ລະວຟົງຈະຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງສານເຄມີທີ່ເປັນໂມເລກຸນນ້ອຍທີ່ຍັງເຫຼືອຢູ່ໄດ້ເຖິງປັດໄຈທີ່ເທົ່າກັບອັດຕາສ່ວນການເຈືອຈາງ. ເພື່ອການລຶບອອກສານເຄມີທີ່ເປັນໂມເລກຸນນ້ອຍຢ່າງສົມບູນ, ການລ້າງ 3-5 ຄັ້ງດ້ວຍທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍເມືອງທີ່ມີຄ່າ MWCO ເໝາະສົມ ມັກຈະບັນລຸການຫຼຸດຜ່ອນສິ່ງປົນເປືືອນໄດ້ 99% ຫຼື ຫຼາຍກວ່ານັ້ນ. ເມືອງຕ້ອງສາມາດກັ້ນໄວ້ຢ່າງສົມບູນເຖິງໂປຼຕີນເປົ້າໝາຍໃນລະຫວ່າງການເຂັ້ມຂຸ້ນຫຼາຍໆ ຄັ້ງ, ສະນັ້ນການເລືອກຄ່າ MWCO ຢ່າງລະມັດລະວັງຈຶ່ງມີຄວາມສຳຄັນເປັນຢ່າງຍິ່ງໃນການປັບຄ່າເກືອ (desalting) ໂດຍທີ່ການປຸງແຕ່ງຊ້ຳໆ ອາດຈະເຮັດໃຫ້ການສູນເສຍນ້ອຍໆ ເກີດຂຶ້ນຊ້ຳໆ ແລະ ສິ່ງນີ້ຈະເຮັດໃຫ້ຜົນຜະລິດທັງໝົດຫຼຸດລົງຢ່າງມີນັກ.

ການປຸງແຕ່ງອະນຸພາກທີ່ເປັນໄວຣັດ ແລະ ອະນຸພາກທີ່ມີຂະໜາດນານໂອ

ເວັກເຕີ້ ເຊິ່ງເປັນໄວຣັດ, ສ່ວນທີ່ຄ້າຍຄືໄວຣັດ, ແລະ ນາໂອພາດທີ່ຖືກອອກແບບມາຢ່າງເປັນພິເສດ ຕ້ອງການການພິຈາລະນາເລື່ອງຄ່າ MWCO (Molecular Weight Cut-Off) ເປັນພິເສດ ເນື່ອງຈາກນ້ຳໜັກໂມເລກຸນທີ່ມີປະສິດທິຜົນຂອງພວກມັນ ແມ່ນມັກຈະເກີນຂອບເຂດສູງສຸດຂອງເມັມເບຣນທີ່ໃຊ້ໃນທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍວິທີ ultrafiltration ທົ່ວໄປ. ໄວຣັດ adeno-associated ທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນປະມານສາມຫາຫ້າເມກາດາລ໌ຕັນ ຕ້ອງການເມັມເບຣນທີ່ໃຊ້ໃນທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍວິທີ ultrafiltration ທີ່ມີຄ່າ MWCO ເຖິງຮ້ອຍກິໂລດາລ໌ຕັນ ຫຼື ສູງກວ່າເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮັບການກັ້ນໄວ້ຢ່າງມີປະສິດທິຜົນ. ສ່ວນໄວຣັດທີ່ມີຂະໜາດໃຫຍ່ກວ່າເຊັ່ນ: lentiviruses ຫຼື adenoviruses ອາດຈະຕ້ອງການເມັມເບຣນທີ່ເຂົ້າໃກ້ກັບຂອບເຂດລະຫວ່າງ ultrafiltration ແລະ microfiltration, ໂດຍມີຄ່າ MWCO ຢູ່ໃນຊ່ວງຕັ້ງແຕ່ສາມຮ້ອຍກິໂລດາລ໌ຕັນ ຫຼື ເຖິງໜຶ່ງພັນກິໂລດາລ໌ຕັນ.

ການເຮັດໃຫ້ຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນຂອງ nano-particle ໂດຍໃຊ້ທໍ່ ultrafiltration ຕ້ອງພິຈາລະນາສະຖານະການຂອງການລວມຕົວຂອງ nano-particle, ຄຸນສົມບັດຂອງຊັ້ນປ້ອມທີ່ຢູ່ເທິງໜ້າພ້ອວ, ແລະ ການປະຕິສຳພັນກັບວັດສະດຸຂອງເມື່ອ. Nano-particle ທີ່ມີ protein ເປັນຊັ້ນປ້ອມ, nano-particle ທີ່ເຮັດຈາກ lipid, ແລະ ການເຊື່ອມຕໍ່ລະຫວ່າງ polymer ແລະ ຢາ ອາດຈະສະແດງເຖິງການຄົງທີ່ທີ່ແຕກຕ່າງຈາກການຄາດເດົາທີ່ອີງໃສ່ຂະໜາດຂອງ nano-particle ເທົ່ານັ້ນ ເນື່ອງຈາກຜົນກະທົບຂອງເຄມີສາດທີ່ໜ້າພ້ອວ. ເປົ້າໝາຍໃນການນຳໃຊ້ເຫຼົ່ານີ້ ແມ່ນມັກຈະເປັນການເຮັດໃຫ້ nano-particle ແຕກຕ່າງກັນ ໃນຂະນະທີ່ກຳຈັດ protein ເສລີ, stabilizer ເກີນ, ຫຼື ວັດຖຸເຄມີທີ່ຍັງບໍ່ໄດ້ເຂົ້າຮ່ວມປະຕິກິລິຍາອອກ. ການເລືອກ MWCO ຕ້ອງສາມາດຮັກສາຄວາມສົມດຸນລະຫວ່າງການຄົງທີ່ຂອງ nano-particle ແລະ ການກຳຈັດສານທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍຢ່າງມີປະສິດທິພາບ, ເຊິ່ງມັກຈະຕ້ອງມີການທົດສອບເປັນເວລາເພື່ອຊອກຫາສະເພີຟິເຄຊັ່ນທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດສຳລັບສູດ nano-particle ແລະ ຂໍ້ກຳນົດການປະມວນຜົນທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງທ່ານ.

ການແກ້ໄຂບັນຫາການເລືອກ MWCO ແລະ ການປັບປຸງປະສິດທິພາບ

ການວິເຄາະບັນຫາການສູນເສຍໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍທີ່ບໍ່ຄາດຄິດ

ເມື່ອທ່ານສັງເກດເຫັນວ່າທໍ່ການກົງຕົວຂອງທ່ານສູນເສຍໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍຜ່ານເມັມເບຣນ ເຖິງແນວໃດກໍຕາມທີ່ທ່ານໄດ້ເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ຕ່ຳກວ່ານ້ຳໜັກໂມເລກຸນທີ່ທີ່ຄາດຄະເນໄວ້ຢ່າງຊັດເຈນ, ອາດຈະມີຫຼາຍປັດໄຈທີ່ເປັນເຫດຜົນ. ການລວມໂມເລກຸນ (Protein aggregation) ຫຼື ການເສື່ອມສະພາບ (degradation) ສາມາດສ້າງເປັນຊິ້ນສ່ວນທີ່ເລັກກວ່າ ເຊິ່ງສາມາດຜ່ານເມັມເບຣນໄດ້ ໂດຍເປັນພິເສດຖ້າຕົວຢ່າງຂອງທ່ານໄດ້ຖືກນຳໄປເກັບຮັກສາໃນຕູ້ເຢັນ-ເຢັນຊ້ຳ, ເກັບໄວ້ເປັນເວລາດົນ, ຫຼື ຢູ່ໃນເງື່ອນໄຂການສະກັດແຍກທີ່ຮຸນແຮງ. ການຢືນຢັນຄວາມເປັນປົກກະຕິ ແລະ ສະພາບການລວມຕົວຂອງໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍດ້ວຍວິທີການວິເຄາະເຊັ່ນ: ການແຍກຕາມຂະໜາດ (size exclusion chromatography) ຫຼື ການກະຈາຍແສງແບບໄດນາມິກ (dynamic light scattering) ຈະຊ່ວຍໃຫ້ທ່ານກຳນົດໄດ້ວ່າ ການປ່ຽນແປງຂອງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນເປັນສາເຫດທີ່ອธິບາຍການສູນເສຍທີ່ບໍ່ຄາດຄິດໄວ້ໄດ້ຫຼືບໍ່.

ການດູດຊຶມຂອງເມັມເບຣນເປັນອີກໜຶ່ງສາເຫດທີ່ພົບເຫັນໄດ້ບໍ່ແປກໃຈຂອງການສູນເສຍເປົ້າໝາຍທີ່ເຫັນໄດ້, ໂດຍເປັນພິເສດກັບໂປຼຕີນທີ່ມີຄວາມເປັນຂັ້ນຕົ້ນຫຼາຍ (hydrophobic) ຫຼື ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນຂອງໂປຼຕີນທີ່ຕ່ຳຫຼາຍເກີນໄປ ເຊິ່ງການປະຕິສຳພັນທີ່ເກີດຂື້ນກັບເນື້ອເຮືອນ (surface interactions) ຈະມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍຂື້ນເມື່ອທຽບກັບມວນລວມຂອງໂປຼຕີນ. ການເປີດເຄື່ອງການເມັມເບຣນຂອງທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕະໂນມັດ (ultrafiltration tube) ດ້ວຍວິທີການເຕີມເຄື່ອງແທນທີ່ມີໂປຼຕີນກ່ອນ ຫຼື ເພີ່ມເຄື່ອງຊ່ວຍທີ່ບໍ່ມີອິ້ອນ (non-ionic detergent) ໃນປະລິມານນ້ອຍໃນຕົວຢ່າງຂອງທ່ານ ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນການສູນເສຍທີ່ເກີດຈາກການດູດຊຶມໄດ້. ຖ້າການສູນເສຍຍັງຄົງເກີດຂື້ນຢູ່ເຖິງແມ່ນວ່າຈະໄດ້ປະຕິບັດວິທີການເຫຼົ່ານີ້ແລ້ວ, ການທົດສອບທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕະໂນມັດທີ່ມີຄ່າ MWCO ຕ່ຳກວ່າອາດຈະຈຳເປັນ, ເຖິງແມ່ນວ່າຈະຂັດຕໍ່ກົດເກນໜຶ່ງສ່ວນສາມ (one-third rule) ກໍຕາມ. ໂປຼຕີນບາງຊະນິດທີ່ມີຮູບຮ່າງທີ່ບໍ່ປົກກະຕິ ຫຼື ມີຄວາມຍືດຫຼຸ່ນສູງ ອາດຈະຕ້ອງເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ຄ່ອນຂ້າງລະມັດລະວັງຫຼາຍກວ່າທີ່ມາດຕະຖານຂອງໂປຼຕີນທີ່ມີຮູບຮ່າງເປັນກົມ (globular protein standards) ຈະແນະນຳ.

ການແກ້ໄຂບັນຫາອັດຕາການກັ້ນທີ່ຊ້າ

ການກົງຜ່ານທໍ່ການກົງແບບຊ້າໆ ຂອງທ່ານ ບ່ອນທີ່ມີການຕິດເຄື່ອນຂອງເມັມເບຣນ, ຄວາມໜືດຂອງຕົວຢ່າງທີ່ສູງເກີນໄປ, ຫຼື ການເລືອກ MWCO ທີ່ເຂັ້ມງວດເກີນໄປສຳລັບປະກອບຂອງຕົວຢ່າງຂອງທ່ານ. ຕົວຢ່າງທີ່ສັບສົນທີ່ມີສ່ວນປະກອບເຊັ່ນ: ລິບິດ, ນິວເຄີກ ອາຊິດ, ຫຼື ສ່ວນປະກອບທີ່ເປັນເມັດ (particulates) ອາດຈະເຮັດໃຫ້ຮູຂອງເມັມເບຣນອຸດຕັນ ແລະ ຫຼຸດລົງຢ່າງມີນັກເຖິງອັດຕາການກົງເມື່ອການເຂັ້ມຂຶ້ນດຳເນີນໄປ. ການກົງເບື້ອງຕົ້ນ (pre-clarifying) ຕົວຢ່າງຂອງທ່ານດ້ວຍການເຄື່ອນໄວ້ (centrifugation) ຫຼື ການກົງຜ່ານເມັມເບຣນທີ່ມີຮູໃຫຍ່ກວ່າ (coarser membrane) ຈະຊ່ວຍກຳຈັດສ່ວນປະກອບທີ່ເປັນເມັດ ເຊິ່ງຖ້າບໍ່ໄດ້ກຳຈັດອອກຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການອຸດຕັນທີ່ເທື້ອຜິວຂອງເມັມເບຣນໃນທໍ່ການກົງແບບ ultrafiltration. ການເຈືອຈາງຕົວຢ່າງທີ່ມີຄວາມໜືດສູງ ຫຼື ການເຮັດວຽກດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນເລີ່ມຕົ້ນຂອງໂປຼຕີນທີ່ຕ່ຳກວ່າອາດຈະປັບປຸງອັດຕາການກົງໄດ້, ແຕ່ວ່າການນີ້ຈະຕ້ອງໃຊ້ເວລາດຳເນີນການເພີ່ມເຕີມເພື່ອບັນລຸອັດຕາການເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍທີ່ຕ້ອງການ.

ຖ້າການກັ້ນຊ້າຍັງຄົງເກີດຂຶ້ນຢູ່ຕະຫຼອດໄປ ເຖິງແມ່ນວ່າຈະໄດ້ປະຕິບັດການປີ້ບປຸງຕົວຢ່າງລ່ວງໆ ການທົດສອບທໍ່ກັ້ນອັດຕາສູງ (ultrafiltration tube) ທີ່ມີຄ່າ MWCO ສູງຂຶ້ນອາດຈະຊ່ວຍປັບປຸງຄວາມໄວໃນການປຸງແຕ່ງ ໂດຍຍັງຮັກສາການກັ້ນທີ່ເໝາະສົມໄວ້ໄດ້. ຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງ MWCO ແລະອັດຕາການຫຼືນ (flow rate) ບໍ່ແມ່ນເສັ້ນຊື່, ແລະການເພີ່ມຄ່າ MWCO ຈາກ 3 ກິໂລດາລ໌ຕັນ ໄປເປັນ 10 ກິໂລດາລ໌ຕັນ ອາດຈະປັບປຸງຄວາມໄວໃນການກັ້ນໄດ້ຢ່າງເດັ່ນຊັດ ໂດຍບໍ່ມີຜົນກະທົບຫຼາຍນັກຕໍ່ການກັ້ນໂປຣຕີນທີ່ມີນ້ຳໜັກເກີນ 30 ກິໂລດາລ໌ຕັນ. ອຸນຫະພູມກໍສົ່ງຜົນຕໍ່ອັດຕາການກັ້ນດ້ວຍ, ໂດຍການປຸງແຕ່ງທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງມັກຈະໃຫ້ອັດຕາການຫຼືນໄວຂຶ້ນກວ່າການປຸງແຕ່ງໃນຫ້ອງເຢັນ ເນື່ອງຈາກຄວາມໜືດ (viscosity) ລົດຕ່ຳລົງ. ແຕ່ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການເລືອກອຸນຫະພູມຕ້ອງຄຳນຶງເຖິງການດຸນດ່ຽນລະຫວ່າງຄວາມໄວໃນການປຸງແຕ່ງ ແລະ ຄວາມສະຖຽນຂອງໂປຣຕີນ ສຳລັບໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງທ່ານ.

ການຈັດການຜົນກະທົບຈາກການເກີດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ເກີດຂື້ນໃນບໍລິເວນທີ່ເກີດການກັ້ນ (Concentration Polarization Effects)

ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນເກີດຂຶ້ນເມື່ອໂມເລກູນທີ່ຖືກກັ້ນໄວ້ເກີດການສັ່ງສີເຂົ້າໃກ້ກັບພື້ນຜິວຂອງເມັມເບຣນໃນທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕາສູງຂອງທ່ານ ເຮັດໃຫ້ເກີດຊັ້ນທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນສູງຢູ່ບໍລິເວນທ້ອງຖິ່ນ ເຊິ່ງຈະຫຼຸດລົງຂະໜາດຂອງຮູທີ່ມີປະສິດທິຜົນ ແລະ ຊ້າລົງອັດຕາການກັ້ນ. ພະເພນອມີນີ້ຈະເດັ່ນຊັດຂຶ້ນເມື່ອຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນເພີ່ມຂຶ້ນ ແລະ ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການປ່ຽນແປງທີ່ເຫັນໄດ້ຕໍ່ຄຸນສົມບັດການກັ້ນໃນຂະນະທີ່ດຳເນີນການ. ການປີ້ນກັບທໍ່ການກັ້ນແບບອັດຕາສູງຢ່າງເບົາໆ ຫຼື ການຂະເບື່ອນຢ່າງເບົາໆເປັນໄລຍະເວລາໃນຂະນະທີ່ກຳລັງປີ້ນຈະເຮັດໃຫ້ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນຖືກຂັດຂວາງ ໂດຍການຈັດສົ່ງຄືນໃໝ່ຂອງໂປຕີນທີ່ເກີດການສັ່ງສີອອກຈາກພື້ນຜິວຂອງເມັມເບຣນ. ແຕ່ຢ່າງໃດກໍຕາມ ການຂະເບື່ອນທີ່ຫຼາຍເກີນໄປອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດຟອມ ຫຼື ການເສື່ອມສະພາບຂອງໂປຕີນສຳລັບໂມເລກູນທີ່ອ່ອນໄຫວ.

ຄວາມໄວຂອງການປັ່ນໃນທໍ່ການກັ້ນແບບເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເຄື່ອນໄຫວ (ultrafiltration) ທີ່ທ່ານໃຊ້ຈະສົ່ງຜົນຕໍ່ຄວາມສົມດຸນລະຫວ່າງອັດຕາການກັ້ນ ແລະ ການປະສົມປະສານຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນ (concentration polarization). ກຳລັງການປັ່ນທີ່ສູງຂຶ້ນຈະເຮັດໃຫ້ອັດຕາການໄຫຼເພີ່ມຂຶ້ນ ແຕ່ຍັງເຮັດໃຫ້ຊັ້ນຂອງການປະສົມປະສານຖືກບີບຢູ່ຕິດກັບເມືອງການກັ້ນຢ່າງເຂັ້ມງວດ, ອາດຈະເຮັດໃຫ້ປະສິດທິຜົນທັງໝົດລົດຕໍ່າລົງ. ສ່ວນຫຼາຍຂອງຄຳແນະນຳການໃຊ້ທໍ່ການກັ້ນແບບເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເຄື່ອນໄຫວ (ultrafiltration) ແນະນຳໃຫ້ໃຊ້ຄວາມໄວຂອງການປັ່ນໃນລະດັບ 3,000 ຫາ 7,000 ເທົ່າຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນ (g-force), ໂດຍຄວາມໄວທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດຈະຂຶ້ນກັບຄວາມໜືດຂອງຕົວຢ່າງ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນຂອງໂປຣຕີນ ແລະ ຄວາມຈຸຂອງເມືອງການກັ້ນ (MWCO). ຖ້າການປະສົມປະສານຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນມີຜົນກະທົບຢ່າງມີນັກຕໍ່ຂະບວນການຂອງທ່ານ, ການເຮັດວຽກທີ່ປັດໄຈຄວາມເຂັ້ມຂຸ່ນຕ່ຳລົງ, ການປຸງແຕ່ງປະລິມານຕົວຢ່າງທີ່ນ້ອຍລົງ, ຫຼື ການໃຊ້ທໍ່ການກັ້ນແບບເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເຄື່ອນໄຫວ (ultrafiltration) ທີ່ມີເນື້ອທີ່ເມືອງການກັ້ນໃຫຍ່ຂຶ້ນ ສາມາດປັບປຸງຜົນໄດ້ໂດຍບໍ່ຕ້ອງປ່ຽນຄວາມຈຸຂອງເມືອງການກັ້ນ (MWCO).

ຄຳພິຈາລະນາຂັ້ນສູງສຳລັບການນຳໃຊ້ທີ່ມີຄວາມເປັນເອກະລັກ

ການເຮັດວຽກກັບນ້ຳຢາທີ່ບໍ່ເຂົ້າກັນໄດ້ກັບເມືອງການກັ້ນ

ສ່ວນປະກອບບັຟເຟີແລະຕົວທາລາຍບາງຢ່າງສາມາດສົ່ງຜົນຕໍ່ຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງເມັມເບຣນ ແລະປ່ຽນຄ່າ MWCO ທີ່ແທ້ຈິງຂອງທ່ານໃນທໍ່ການຕົກເຮັດດ້ວຍເມັມເບຣນ. ອາຊິດທີ່ເຂັ້ມ, ດັ່ງເຊັ່ນ: ບາດເຈື້ອນ, ຕົວທາລາຍອິນິນິກ, ແລະ ຕົວເຮັດໃຫ້ເກີດການເກີດອົກຊີເດຊັນ ສາມາດເຮັດໃຫ້ເມັມເບຣນທີ່ຜະລິດຈາກເຊລູໂລສ ຮີຈີເນີເຣດເສຍຫາຍ, ໃນຂະນະທີ່ເມັມເບຣນທີ່ຜະລິດຈາກ polyethersulfone ມີຄວາມຕ້ານທານທາງເຄມີທີ່ດີກວ່າ ແຕ່ອາດຈະສະແດງຄວາມສາມາດໃນການຈັບເປັນປະຕິກິລິຍາກັບໂປຼຕີນຫຼາຍຂຶ້ນໃນສະພາບການບາງຢ່າງ. ເມື່ອການນຳໃຊ້ຂອງທ່ານຕ້ອງການບັຟເຟີທີ່ມີສ່ວນປະກອບຕົວທາລາຍອິນິນິກໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ສູງ, ດີເຕີຈັນ, ຫຼື ຄ່າ pH ທີ່ເຖິງຂັ້ນເກີນໄປ, ການເລືອກທໍ່ການຕົກເຮັດດ້ວຍເມັມເບຣນທີ່ມີເຄມີສາດຂອງເມັມເບຣນທີ່ເໝາະສົມ ຈະມີຄວາມສຳຄັນເທົ່າກັບການເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ຖືກຕ້ອງ.

ການບວມຂື້ນ ຫຼື ຫຼຸດລົງຂອງເມັມເບຣນໃນປະຕິກິລິຍາຕໍ່ປະກອບຂອງບັຟເຟີສາມາດປ່ຽນແປງ MWCO ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິຜົນໂດຍການປ່ຽນຂະໜາດຂອງຮູ. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງຕົວກະຕຸ້ນທີ່ເຮັດໃຫ້ໂຄງສ້າງຂອງໂປຼຕີນເສື່ອມເສຍ (chaotropic agents) ເຊັ່ນ: ເອີເຣຍ (urea) ຫຼື ກວານິດິນຽມ ຄລໍໄເດ (guanidinium chloride) ສາມາດເຮັດໃຫ້ເມັມເບຣນບວມຂື້ນ, ອັນເປັນເຫດໃຫ້ MWCO ທີ່ແທ້ຈິງເພີ່ມຂື້ນ, ເຊິ່ງອາດຈະເຮັດໃຫ້ສູນເສຍໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍ. ຢ່າງໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ສ່ວນປະກອບບາງຢ່າງຂອງບັຟເຟີສາມາດເຮັດໃຫ້ເມັມເບຣນຫຼຸດລົງ, ອັນເຮັດໃຫ້ຂະໜາດຮູທີ່ແທ້ຈິງຫຼຸດລົງ ແລະ ອາດຈະເຮັດໃຫ້ອັດຕາການກົງກັນຂ້າມຊ້າລົງ. ເມື່ອເຮັດວຽກກັບບັຟເຟີທີ່ບໍ່ມາດຕະຖານ, ການປຶກສາຕາຕະລາງຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງຜູ້ຜະລິດ ແລະ ການທົດສອບການຮັກສາ (retention tests) ໃນຂະໜາດນ້ອຍດ້ວຍປະກອບບັຟເຟີທີ່ເຈົ້າໃຊ້ຈະຮັບປະກັນວ່າ MWCO ທີ່ເລືອກໄດ້ຈະເຮັດວຽກຕາມທີ່ຄາດຫວັງໃນສະພາບການໃຊ້ງານຈິງຂອງເຈົ້າ.

ການພິຈາລະນາການຂະຫຍາຍຂະໜາດຈາກການຄົ້ນຄວ້າໄປສູ່ການຜະລິດ

ຫຼັກການເລືອກ MWCO ທີ່ຖືກຈັດຕັ້ງຂຶ້ນດ້ວຍທໍ່ການແຍກສານດ້ວຍການກົດຜ່ານເມັມເບຣນໃນຂະໜາດນ້ອຍສຳລັບການຄົ້ນຄວ້າ ມັກຈະສາມາດນຳໄປໃຊ້ກັບປະລິມານການຜະລິດທີ່ໃຫຍ່ຂຶ້ນໄດ້ ແຕ່ອາດຈະຕ້ອງມີການປັບປຸງບາງຢ່າງ. ຄຸນລັກສະນະການເຮັດວຽກຂອງເມັມເບຣນ ລວມທັງຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງ MWCO ແລະຄວາມຕ້ານທານຕໍ່ການອຸດຕັນ ອາດແຕກຕ່າງກັນໄປຕາມຮູບແບບເມັມເບຣນແລະຜູ້ຜະລິດທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ເມື່ອຂະຫຍາຍຂະໜາດການຜະລິດ ການຮັກສາເມັມເບຣນທີ່ມີເຄມີສາດເດີມ ແລະຜູ້ຜະລິດເດີມຈະຮັບປະກັນໃຫ້ມີການກັ້ນທີ່ສອດຄ່ອງກັນ. ອີງຕາມນີ້ ເນື້ອທີ່ເມັມເບຣນທີ່ໃຫຍ່ຂຶ້ນ ແລະຮູບຮ່າງອຸປະກອນທີ່ແຕກຕ່າງກັນອາດຈະມີຜົນຕໍ່ການເກີດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ເກີດຈາກການກົດຜ່ານ (concentration polarization), ເວລາການປຸງແຕ່ງ ແລະເງື່ອນໄຂການເວີນດ້ວຍຄວາມເລັ່ງສູງທີ່ເໝາະສົມ.

ຂະບວນການການຕົກເສຍດ້ວຍເມັມເບຣນທີ່ໃຊ້ໃນຂະນາດການຜະລິດ ມັກຈະໃຊ້ເຊລທີ່ມີການກະເປືອນ (stirred cells) ຫຼື ລະບົບການຕົກເສຍດ້ວຍການໄຫຼຜ່ານແຖວຂ້າງ (tangential flow filtration) ແທນທີ່ຈະໃຊ້ທໍ່ຕົກເສຍດ້ວຍເມັມເບຣນທີ່ຕື່ມດ້ວຍການປັ່ນ (centrifugal ultrafiltration tubes), ແຕ່ຫຼັກການໃນການເລືອກຄ່າ MWCO ຍັງຄົງຄືເດີມໃນທຸກຮູບແບບ. ສະພາບການທີ່ເກີດຂຶ້ນຢູ່ໃນລະບົບ tangential flow ຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນບັນຫາການລວມຕົວຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ (concentration polarization) ເມື່ອທຽບກັບການຕົກເສຍແບບ dead-end ໃນອຸປະກອນທີ່ຕື່ມດ້ວຍການປັ່ນ, ເຊິ່ງອາດຈະເຮັດໃຫ້ສາມາດໃຊ້ຄ່າ MWCO ທີ່ໃກ້ຄຽງກັບນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງເປົ້າໝາຍໄດ້. ເຖິງຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຄວາມສຳພັນພື້ນຖານລະຫວ່າງ MWCO ແລະປະສິດທິພາບໃນການກັກເກັບ (retention efficiency) ຍັງຄົງຄືເດີມບໍ່ວ່າຈະໃຊ້ອຸປະກອນໃນຮູບແບບໃດ. ການທຳການທົດສອບໃນຂະນາດນ້ອຍຢ່າງຄູ່ song (parallel small-scale tests) ໂດຍໃຊ້ທໍ່ຕົກເສຍດ້ວຍເມັມເບຣນສຳລັບການຄົ້ນຄວ້າ (research ultrafiltration tubes) ແລະອຸປະກອນຂະນາດການຜະລິດ ໂດຍໃຊ້ຄ່າ MWCO ເດີມໆ ຈະຊ່ວຍຢືນຢັນວ່າຈຳເປັນຕ້ອງມີການປັບປຸງເພີ່ມເຕີມໃນຂະນະທີ່ເຮັດການຂະຫຍາຍຂະນາດ (scale-up) ຫຼືບໍ່.

ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ ແລະ ຄວາມເປັນເອກະພາບລະຫວ່າງຊຸດຜະລິດ

ການຮັກສາຜົນໄດ້ຮັບທີ່ເປັນເອກະລັກທົ່ວທັງການທົດລອງຫຼາຍຄັ້ງ ຫຼື ການຜະລິດໃນແຕ່ລະຊຸດຕ້ອງໃຫ້ຄວາມສົນໃຈຕໍ່ຄຸນນະພາບຂອງທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍວິທີການອັດຕະໂນມັດ (ultrafiltration) ແລະ ສະພາບການເກັບຮັກສາທີ່ຖືກຕ້ອງ. ເຍື່ອການກັ້ນອາດຈະເສື່ອມສະພາບໄປຕາມເວລາ ຖ້າຖືກສຳຜັດກັບອຸນຫະພູມທີ່ເກີນໄປ ຄວາມຊື້ນ ຫຼື ມືອນເປື່ອນ ເຊິ່ງອາດຈະປ່ຽນແປງລັກສະນະຂອງຄຸນສົມບັດການກັ້ນຕາມນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ (MWCO). ການໃຊ້ທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍວິທີການອັດຕະໂນມັດຈາກຊຸດການຜະລິດດຽວກັນສຳລັບການນຳໃຊ້ທີ່ສຳຄັນ ຈະຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ເກີດຈາກຄວາມແຕກຕ່າງຂອງແຕ່ລະຊຸດການຜະລິດເຍື່ອການກັ້ນ. ການເກັບຮັກສາອຸປະກອນໃນຫໍ່ຫຸ້ມທີ່ປິດຢ່າງດີ ໃນສະພາບອຸນຫະພູມ ແລະ ຄວາມຊື້ນທີ່ຄວບຄຸມໄດ້ຈະຊ່ວຍຮັກສາປະສິດທິພາບຂອງເຍື່ອການກັ້ນໄວ້ຈົນເຖິງເວລານຳໃຊ້.

ການຈັດຕັ້ງປະຕິບັດເຄື່ອງມືການຢືນຢັນການຮັກສາ (retention verification protocols) ສະຫຼຸບໃຫ້ທ່ານແນ່ໃຈວ່າທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍວິທີການອັດຕະລາສູງ (ultrafiltration tube) ຂອງທ່ານຍັງຄົງເຮັດວຽກໄດ້ຕາມຂໍ້ກຳນົດທີ່ກຳນົດໄວ້. ການປະມວນຜົນຕົວຢ່າງການຄວບຄຸມ (control samples) ຮ່ວມກັບມາດຕະຖານທີ່ຮູ້ຈັກນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ (known molecular weight standards) ແລະ ຕົວຢ່າງທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງ (experimental samples) ຈະໃຫ້ການຢືນຢັນໃນເວລາຈິງ (real-time confirmation) ວ່າຄ່າ MWCO ຢູ່ໃນສະພາບທີ່ເຮັດວຽກໄດ້ຕາມທີ່ຄາດຫວັງ. ການວັດແທກຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເປົ້າໝາຍ (target molecule concentration) ໃນທັງສ່ວນທີ່ຖືກກັ້ນໄວ້ (retentate) ແລະ ສ່ວນທີ່ໄດ້ຜ່ານການກັ້ນ (filtrate) ຈະເຮັດໃຫ້ທ່ານສາມາດຄຳນວນປະສິດທິຜົນການຮັກສາ (retention efficiency) ທີ່ແທ້ຈິງ ແລະ ສາມາດສັງເກດເຫັນບັນຫາກ່ຽວກັບປະສິດທິພາບຂອງເມັມເບຣນ (membrane performance issues) ໃນເວລາທີ່ເປັນໄປໄດ້ເລີ່ມຕົ້ນ. ມາດຕະການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບເຫຼົ່ານີ້ມີຄວາມສຳຄັນເປັນຢ່າງຍິ່ງໃນສະພາບແວດລ້ອມທີ່ມີການຄວບຄຸມຢ່າງເຂັ້ມງວດ ເຊັ່ນ: ການຜະລິດຢາ (pharmaceutical manufacturing) ຫຼື ການປະມວນຜົນຕົວຢ່າງທາງດ້ານການແພດ (clinical sample processing) ໂດຍທີ່ການບັນທຶກເອກະສານກ່ຽວກັບປະສິດທິພາບທີ່ສົມ່ຳເສີມຂອງທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍວິທີການອັດຕະລາສູງ (ultrafiltration tube) ຈະສະຫນັບສະຫນູນການຢືນຢັນຂະບວນການທັງໝົດ (process validation) ແລະ ການຮັບປະກັນຄຸນນະພາບຜະລິດຕະພັນ (product quality assurance).

ຄຳຖາມທີ່ຖືກຖາມເລື້ອຍໆ

ເກີດຫຍັງຂຶ້ນຖ້າຂ້ອຍເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ໃກ້ກັບນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງປະຕິກິລິຍາເປົ້າໝາຍ (target protein molecular weight) ຂອງຂ້ອຍເກີນໄປ?

ການເລືອກທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍເມັມເບີນ (ultrafiltration tube) ທີ່ມີຄ່າ MWCO ເກີນໄປໃກ້ກັບນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງປະຕິກິລິຍາທີ່ຕ້ອງການ ມັກຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ເກີດການສູນເສຍປະຕິກິລິຍາເພີ່ງເກີດຂຶ້ນເຖິງແມ່ນຈະເປັນສ່ວນໜຶ່ງເທົ່ານັ້ນ ຜ່ານເມັມເບີນ ເຊິ່ງຈະຫຼຸດຜ່ອນອັດຕາການດຶງກັບຄືນທັງໝົດ. ຄວາມປະສິດທິຜົນໃນການກັ້ນຈະຫຼຸດລົງຢ່າງມີນັກເມື່ອຄ່າ MWCO ເຂົ້າໃກ້ກັບນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງປະຕິກິລິຍາເປົ້າໝາຍ ເນື່ອງຈາກຂໍ້ກຳນົດຂອງເມັມເບີນແທນທີ່ຈະເປັນຈຸດຕັດທີ່ແນ່ນອນ ກັບຄວາມສາມາດໃນການກັ້ນທີ່ອີງໃສ່ອັດຕາການກັ້ນທີ່ຖືກຄຳນວນເປັນສະຖິຕິ. ນອກຈາກນີ້ ປະຕິກິລິຍາທີ່ມີຮູບຮ່າງຍືດຫຍືນຫຼືມີຄວາມຍືດຫຍຸ່ນສູງອາດຈະຜ່ານຮູຂອງເມັມເບີນໄດ້ງ່າຍກວ່າປະຕິກິລິຍາທີ່ມີຮູບຮ່າງກົມ (globular protein standards) ທີ່ຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອກຳນົດຄ່າ MWCO. ເພື່ອຮັບປະກັນການກັ້ນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ ແລະ ອັດຕາການດຶງກັບຄືນທີ່ສູງ ທ່ານຄວນເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ເທົ່າກັບໜຶ່ງສາມສ່ວນໜຶ່ງຫຼືໜຶ່ງສອງສ່ວນໜຶ່ງຂອງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຂອງປະຕິກິລິຍາເປົ້າໝາຍ ເພື່ອສ້າງຄວາມປອດໄພທີ່ເໝາະສົມຕໍ່ກັບຄວາມແຕກຕ່າງດ້ານຮູບຮ່າງ ແລະ ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງຄ່າ MWCO ທີ່ກຳນົດໄວ້.

ຂ້ອຍສາມາດໃຊ້ຄ່າ MWCO ຂອງທໍ່ການກັ້ນດ້ວຍເມັມເບີນ (ultrafiltration tube) ເດີມນີ້ກັບຕົວຢ່າງ DNA ແລະ ປະຕິກິລິຍາທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຄ່ອຍຄ່າຍກັນໄດ້ຫຼືບໍ?

DNA ແລະ ໂປຟີນທີ່ມີນ້ຳໜັກໂມເລກຸນເທົ່າກັນຕ້ອງໃຊ້ການເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ ເນື່ອງຈາກຮູບຮ່າງທາງດ້ານຮ່າງກາຍ ແລະ ຮັດສະໝີຂອງພວກມັນໃນນ້ຳ (hydrodynamic radii) ມີຄວາມແຕກຕ່າງຢ່າງມີນັກ. ອາຊິດນິວເຄີກ (nucleic acids) ມີຮູບຮ່າງເປັນເສັ້ນຍາວ (extended linear) ຫຼື ເປັນເສັ້ນເກີດຄູ່ (double-helix) ທີ່ເຮັດໃຫ້ຂະໜາດທີ່ເຫັນໄດ້ (effective size) ໃຫຍ່ຂຶ້ນເທື່ອລະຫຼາຍເທົ່າເທື່ອ ເມື່ອທຽບກັບໂປຟີນທີ່ມີຮູບຮ່າງກົມ (globular proteins). ດັ່ງນັ້ນ, ຄ່າ MWCO ຂອງທໍ່ ultrafiltration ທີ່ເໝາະສົມສຳລັບໂປຟີນທີ່ມີນ້ຳໜັກ 50 kilodalton ອາດຈະບໍ່ສາມາດກັ້ນ DNA fragment ທີ່ມີຂະໜາດ 50 kilobase ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິຜົນ ແລະ ອາດເກີດການສູນເສຍຢ່າງມີນັກ. ເມື່ອປະມວນຜົນອາຊິດນິວເຄີກ, ຄວນເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ເທົ່າກັບ 1/5 ຫຼື 1/10 ຂອງນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ ແທນທີ່ຈະເປັນອັດຕາ 1/3 ດັ່ງທີ່ໃຊ້ກັບໂປຟີນ. ການເລືອກທີ່ເຂັ້ມງວດນີ້ເປັນການຄຳນຶງເຖິງຮູບຮ່າງຍາວ (elongated shape) ຂອງອາຊິດນິວເຄີກ ແລະ ສຳຫຼັບການຮັກສາໄວ້ຢ່າງເໝາະສົມໃນຂະນະທີ່ກຳລັງເຂັ້ມຂຸ້ນ (concentration) ຫຼື ປ່ຽນບັຟເຟີ (buffer exchange).

ຂ້ອຍຈະຮູ້ໄດ້ແນວໃດວ່າບັນຫາການກະທົບຕໍ່ເມືອງ (membrane fouling) ຫຼື ການເລືອກຄ່າ MWCO ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ ແມ່ນເປັນສາເຫດທີ່ເຮັດໃຫ້ການກົງຕາມຊ້າ?

ການແຍກຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງການອຸດຕັນຂອງເມືອງແລະການເລືອກ MWCO ທີ່ບໍ່ເໝາະສົມ ຕ້ອງໃຊ້ການປະເມີນຜົນການປະຕິບັດຂອງທໍ່ການກົງໄຫຼ່ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສູງຢ່າງເປັນລະບົບ. ຖ້າການກົງໄຫຼ່ເລີ່ມຕົ້ນດ້ວຍອັດຕາທີ່ເໝາະສົມ ແຕ່ຊ້າລົງຢ່າງຮຸນແຮງເມື່ອການເຂັ້ມຂົ້ນດຳເນີນໄປ ນີ້ເປັນສັນຍານວ່າການອຸດຕັນຂອງເມືອງຈາກສ່ວນປະກອບຂອງຕົວຢ່າງເປັນສາເຫດທີ່ເປັນໄປໄດ້. ການກະທຳການລ່ວງໆ ເຊັ່ນ: ການຕັ້ງຕົວຢ່າງດ້ວຍການເວື່ອນ ຫຼື ການໃຊ້ຕົວກັ້ນລ່ວງໆທີ່ມີຂະໜາດເປີດໃຫຍ່ຂຶ້ນ ສາມາດຢືນຢັນວ່າການອຸດຕັນເປັນບັນຫາ ຖ້າຂັ້ນຕອນເຫຼົ່ານີ້ຊ່ວຍຄືນຟື້ນອັດຕາການໄຫຼ່ທີ່ປົກກະຕິ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ ຖ້າການກົງໄຫຼ່ຊ້າຕັ້ງແຕ່ເລີ່ມຕົ້ນ ແລະ ຍັງຄົງຊ້າຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງທັງໝົດໃນຂະນະທີ່ດຳເນີນການ ອາດຈະເກີດຈາກການເລືອກ MWCO ທີ່ຕ່ຳເກີນໄປສຳລັບປະກອບຂອງຕົວຢ່າງຂອງທ່ານ. ການທົດສອບທໍ່ການກົງໄຫຼ່ທີ່ມີ MWCO ສູງຂຶ້ນຖັດໄປຈະເປີດເຜີຍວ່າບັນຫາເກີດຈາກຂະໜາດຮູທີ່ຈຳກັດ ຫຼື ບໍ່ແມ່ນການອຸດຕັນ ໂດຍເງື່ອນໄຂວ່າ MWCO ທີ່ສູງຂຶ້ນນີ້ຍັງສາມາດກັ້ນໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍຂອງທ່ານໄດ້ຢ່າງເໝາະສົມ.

ຂ້ອຍຄວນປັບແຕ່ງການເລືອກ MWCO ຂອງຂ້ອຍເມື່ອເຮັດວຽກກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງໂປຼຕີນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຫຼືບໍ?

ຄ່າ MWCO ຂອງທໍ່ການຕົກແຕ່ງດ້ວຍເມັດສານທີ່ເໝາະສົມທີ່ສຸດຈະຄົງທີ່ຢູ່ໃນທຸກໆຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງໂປຣຕີນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ ສຳລັບໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍທີ່ກຳນົດໄວ້; ແຕ່ພຶດຕິກຳການປຸງແຕ່ງອາດຈະປ່ຽນແປງໄປຕາມການເພີ່ມຂື້ນຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ. ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງໂປຣຕີນທີ່ສູງຫຼາຍ, ຄວາມໜືດທີ່ເພີ່ມຂື້ນ ແລະ ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ (concentration polarization) ອາດຈະເຮັດໃຫ້ອັດຕາການຕົກແຕ່ງຊ້າລົງ ເຖິງແມ່ນວ່າຈະເລືອກຄ່າ MWCO ໃດກໍຕາມ. ແຕ່ຄຸນລັກສະນະການກັ້ນທີ່ກຳນົດດ້ວຍຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງ MWCO ແລະ ນ້ຳໜັກໂມເລກຸນຈະບໍ່ປ່ຽນແປງພື້ນຖານຕາມຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ. ຖ້າທ່ານປະເຊີນບັນຫາໃນການປຸງແຕ່ງທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງ, ການຈັດການຄວາມໜືດດ້ວຍການເຈືອຈາງຕົວຢ່າງ ຫຼື ການປີ່ນປົວການປຸງແຕ່ງໃຫ້ດີຂື້ນຈະເໝາະສົມກວ່າການປ່ຽນຄ່າ MWCO. ຄ່າຕັດຕໍ່ນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ (molecular weight cut-off) ຄວນຖືກເລືອກຕາມຂະໜາດຂອງໂມເລກຸນເປົ້າໝາຍຂອງທ່ານ ໂດຍໃຊ້ຄຳແນະນຳທົ່ວໄປ, ຫຼັງຈາກນັ້ນຈຶ່ງຄວນປັບແຕ່ງເງື່ອນໄຂການປຸງແຕ່ງເຊັ່ນ: ອັດຕາຄວາມໄວຂອງການປັ່ນ (centrifugation speed), ອຸນຫະພູມ, ແລະ ອັດຕາການເຂັ້ມຂຸ້ນ (concentration factor) ໃຫ້ເໝາະສົມກັບຂອບເຂດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງທ່ານ.