Koja je granična količina molekularne mase (MWCO) idealna za ultrafiltraciju cijevi?

Izbor odgovarajuće granice molekularne težine za ultrafiltracijsku cijev je kritična odluka koja izravno utječe na uspjeh koncentracije proteina, razmjenu tampona ili radni tok pripreme uzorka. U slučaju da se ne može utvrditi da li je to potrebno, potrebno je utvrditi razinu i razinu molekula. Razumijevanje kako prilagoditi MWCO veličini molekula cilja, zahtjevima čistoće i potrebama analize nizvodno osigurava optimalan oporavak, minimalni gubitak uzorka i pouzdane rezultate koji se mogu reproducirati u svim vašim istraživačkim ili procesima kontrole kvalitete.

Idealna MWCO za ultrafiltracijsku cijev ovisi o molekularnoj težini ciljanog analita, sastavu matrice uzorka i specifičnim ciljevima procesa separacije. Iako postoje opće smjernice, uspješna selekcija MWCO-a zahtijeva razumijevanje odnosa između veličine pore membrane, zadržavanja ciljanog molekula i učinkovitosti uklanjanja kontaminanta. U ovom članku se pruža sustavni okvir za određivanje optimalne MWCO za vašu specifičnu primjenu, pokrivajući temeljna načela selektivnosti membrane, praktične kriterije za odabir različitih vrsta biomolekula i strategije za rješavanje problema kada standardni pristupi ne pružaju očekivane rezultate.

Ustanovljeni kriteriji za utvrđivanje učinkovitosti ultrafiltracije

Definiranje ograničenja molekularne težine u praktičnim uvjetima

U slučaju da je u slučaju ultrafiltracije primjenjivo, u slučaju da je u slučaju ultrafiltracije primjenjivo, u slučaju da je u slučaju ultrafiltracije primjenjivo, u slučaju da je u slučaju ultrafiltracije primjenjivo, u slučaju da je u slučaju ultrafiltracije primjenjivo, u slučaju da je u slučaju ultrafil U skladu s člankom 3. stavkom 1. točkom (a) ovog članka, za sve proizvode koji sadrže gume ili gume, za koje se primjenjuje ta specifikacija, utvrđuje se da su gume i gume gume gume gume. U skladu s člankom 3. stavkom 2. točkom (a) Uredbe (EZ) br. 1225/2009 Komisija je odlučila da se za razdoblje od 1. lipnja 2017. do 31. prosinca 2017. Proizvođači određuju vrijednosti MWCO koristeći globularne standarde proteina pod definiranim uvjetima ispitivanja, što znači da se stvarno ponašanje zadržavanja može razlikovati ovisno o obliku, naboju i fleksibilnosti specifičnog ciljnog molekula.

U slučaju ultrafiltracijske cijevi, veličina pore membrane izravno se povezuje s navedenim MWCO-om, stvarajući barijeru za isključivanje veličine koja omogućuje prolazak manjih molekula dok se koncentrišu veći molekuli u retentatu. Odnos između veličine pora i MWCO nije linearan jer molekularna zadržavanje ovisi o hidrodinamskom radijusu, a ne samo molekularnu težinu. Izduženi ili fleksibilni molekuli mogu lakše prolaziti kroz membrane nego kompaktni kuglični proteini slične molekularne težine. Ova varijacija objašnjava zašto je empirijsko ispitivanje ponekad potrebno za potvrdu da određeni MWCO pruža adekvatnu zadržavanje za vaš specifični ciljni molekul u matrici uzorka.

U slučaju da se ne primjenjuje, to se može koristiti za određivanje vrijednosti.

Materijal membrane koji se koristi u ultrafiltracijskoj cijevi značajno utječe na preciznost i dosljednost MWCO performansi. Regenerirane celulozne membrane imaju nisku vezavost s proteinima i konzistentnu raspodjelu veličine pora, što ih čini pogodnim za primjene koje zahtijevaju visoke stope oporavka i predvidljive karakteristike zadržavanja. Polietersulfonske membrane pružaju odličnu kemijsku otpornost i brže protokrate, iako mogu u nekim primjenama pokazati nešto veću vezivanje s proteinima. Proces proizvodnje i standardi kontrole kvalitete koji se primjenjuju na proizvodnju membrana izravno utječu na to koliko se stvarni profil zadržavanja podudara s navedenom specifikacijom MWCO-a.

Površinska svojstva membrane također utječu na MWCO performanse utječući na to kako se molekuli približavaju i međusobno komuniciraju s membranskim pore. Hidrofilne membrane smanjuju adsorpciju proteina i poboljšavaju oporavak, ali mogu dopustiti da neki veći molekuli prođu ako usvoje proširenu konformaciju. Karakteristike membranske naplate mogu stvoriti elektrostatičke interakcije koje ili poboljšavaju ili smanjuju učinkovitost zadržavanja izvan onoga što bi samo molekularna veličina predvidjela. Razumijevanje tih ponašanja specifičnih za materijal pomaže vam predvidjeti kada će standardna pravila za odabir MWCO-a zahtijevati prilagodbu za vašu određenu primjenu i karakteristike ciljanog molekula.

U skladu s člankom 3. stavkom 2.

Pravilo o trećini do polovice za izbor MWCO-a

Najčešće primjenjena smjernica za odabir ultrafiltracijska cijev MWCO mora odabrati graničnu vrijednost koja je jedna trećina do polovice molekularne težine vašeg ciljnog proteina ili biomolekula. Ovaj konzervativni pristup maksimalno povećava učinkovitost zadržavanja, a istovremeno omogućuje da manje onečišćujući tvari i komponente tampona učinkovito prolaze. Primjerice, ako koncentrirate protein s molekularnom težinom od trideset kilodaltona, odabir ultrafiltracijske cijevi s deset kilodaltona MWCO osiguraće pouzdan zadržavanje dok učinkovito uklanjate soli, male peptide i druge nečistoće male molekularne težine iz uzorka.

U skladu s člankom 3. stavkom 2. točkom (a) ovog članka, za određene proizvode za koje se primjenjuje ovaj članak, za određene proizvode za koje se primjenjuje ovaj članak, za određene proizvode za koje se primjenjuje ovaj članak, za određene proizvode za koje se primjenjuje ovaj članak, primjenjuje se sljede Odabirom MWCO značajno niže od ciljne molekularne težine, kreirate sigurnosnu maržu koja nadoknađuje molekule koje mogu usvojiti proširenu konformaciju ili za blage varijacije u raspodjeli veličine pore membrane. Pravilo od trećine do polovice posebno dobro djeluje za kugličane proteine s kompaktnim tercijarnim strukturama. U slučaju da se primjenjuje metoda za utvrđivanje vrijednosti MWCO-a, potrebno je utvrditi razinu i razinu protokola.

U skladu s člankom 4. stavkom 1.

Nukleinske kiseline, linearni peptidi i unutarnje poremećeni proteini zahtijevaju modifikirane strategije selekcije MWCO-a jer se njihovo hidrodinamsko ponašanje znatno razlikuje od kuglatnih proteina. DNK i RNK molekuli imaju proširenu dvostruku ili jednonakonformu konformaciju koja stvara veće učinkovite hidrodinamike radije od globularnih proteina jednake molekularne težine. U slučaju koncentracije nukleinskih kiselina ultrafiltracijskom cijevom, možda će biti potrebno odabrati MWCO koji je jedna petina do jedna desetina molekularne mase kako bi se osigurala adekvatna zadržavanje. Za trideset kilobasični DNK fragment može biti potrebna tri kilodaltona ili čak niža MWCO za učinkovitu koncentraciju, ovisno o tome je li nukleinska kiselina dvostrana, jednostrana ili kompleksirana s proteinima.

Fleksibilni peptidi i proteinski fragmenti bez stabilne tercijarne strukture mogu lakše proći kroz pore membrane nego preoklopljeni proteini, što zahtijeva niže vrijednosti MWCO-a nego što bi standardne smjernice sugerirale. Micele deterdženta, lipidne vezikle i proteinski kompleksi predstavljaju dodatne izazove jer njihova učinkovita veličina ovisi o stanju agregacije i uvjetima rastvora. Temperatura, jonska snaga, pH i prisutnost kaotropnih ili redukcijskih agensa mogu promijeniti molekularnu konformaciju i posljedično utjecati na ponašanje zadržavanja. U slučaju da se radi s tim nestandardnim biomolekulama, često je potrebno provjeravati s više vrijednosti MWCO kako bi se utvrdila optimalna specifikacija ultrafiltracijske cijevi za vaše specifične zahtjeve primjene.

U slučaju da se uzorak ne može upotrebljavati za ispitivanje, potrebno je uzeti u obzir:

Sastav matrice uzorka utječe na izbor MWCO-a tako što određuje koje onečišćujuće tvari moraju biti uklonjene i koje komponente moraju ostati. Ako je vaš primarni cilj uklanjanje kontaminanata male molekularne težine kao što su soli, deterdženti ili inhibitori malih molekula, a istovremeno zadržavanje ciljanog proteina, odabir MWCO-a znatno ispod ciljne molekularne težine osigurava učinkovitu razmjenu tampona. Međutim, ako uzorak sadrži više proteina ili biomolekula s različitim molekularnim težinama, selekcija MWCO postaje kompromis između zadržavanja željenih komponenti i uklanjanja neželjenih vrsta.

U složenim biološkim uzorcima kao što su ćelijski lizati, serum ili kulturni supernatanti sadrže različite molekularne vrste koje mogu zagaziti membranu ili se natjecati za zadržavanje. U tim situacijama, optimalna MWCO za ultrafiltracijsku cijev uravnotežuje nekoliko konkurentskih čimbenika uključujući zadržavanje cilja, razmak zagađivača, otpornost na prljavštinu membrane i vrijeme obrade. U slučaju da se ne primjenjuje primjena ovog standarda, test se provodi na temelju podataka iz članka 4. stavka 2. točke (a) Uredbe (EZ) br. 1907/2006 i na temelju podataka iz članka 4. stavka 2. točke (b) Uredbe (EZ) br. 1907/2006. S druge strane, ako je MWCO previsok, može se dogoditi da se ciljni molekul djelomično izgubi ili da se ne uklone dovoljno interferirajuće tvari. U slučaju da se u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju

U skladu s člankom 4. stavkom 2.

Ulozi u koncentraciju proteina i razmjenu tampona

U slučaju da se ne primjenjuje metoda ultrafiltracije, u slučaju da se ne primjenjuje metoda ultrafiltracije, u slučaju da se ne primjenjuje metoda ultrafiltracije, u slučaju da se ne primjenjuje metoda MWCO, u slučaju da se ne primjenjuje metoda MWCO, u slučaju da se ne primjenjuje metoda MWCO, Za monoklonska antitijela i imunglobulinske preparate s molekularnom težinom oko sto pedeset kilodaltona, ultrafiltracijska cijev MWCO od trideset kilodaltona ili pedeset kilodaltona pruža odličnu zadržavanje dok omogućuje brzu razmjenu tampona. Manji proteini kao što su enzimi, citokini ili faktori rasta u rasponu od deset do pedeset kilodaltona obično zahtijevaju deset kilodaltona ili tri kilodaltona MWCO membrana ovisno o tome je li željena potpuna zadržavanje ili mala frakcija molekularne težine.

U slučaju da se ne provodi ispitivanje, ispitivanje se provodi u skladu s postupkom utvrđenim u Prilogu I. U slučaju da se primjenjuje metoda za utvrđivanje koncentracije, u slučaju primjene metode za utvrđivanje koncentracije, treba se utvrditi da je u skladu s člankom 6. stavkom 3. U slučaju da se ne provodi ispitivanje, ispitivanje se provodi u skladu s postupkom utvrđenim u Prilogu I. U slučaju primjene za razmjenu proteinskih tampona, postizanje smanjenja volumena najmanje desetostruko omogućuje učinkovitu zamjenu izvornog tampona uz održavanje oporavka proteina iznad 95% kada se odabere odgovarajuća MWCO.

Odsoljenje i uklanjanje malih molekula

Za uklanjanje soli, nukleotida, redukcijskih sredstava ili drugih malih molekula iz uzoraka proteina potrebna je ultrafiltracijska cijev MWCO koja zadržava protein dok dopušta slobodan prolaz kontaminanta. Razlika u molekularnoj težini između tipičnih proteina i malih molekula dovoljno je velika da je odabir MWCO-a relativno jednostavan za aplikacije za odsalanje. Ultrafiltracijska cijev MWCO od tri kilodaltona učinkovito zadržava proteine iznad deset kilodaltona, a omogućuje kvantitativno uklanjanje soli, glicerola, imidazola i drugih tamponskih komponenti s molekularnom težinom ispod petsto Daltona.

U slučaju da se ne primjenjuje primjena ovog standarda, ispitivanje se provodi u skladu s člankom 6. stavkom 2. U slučaju da se ne primjenjuje primjena ovog standarda, testiranje se provodi na temelju postupka utvrđenog u Prilogu I. Za potpuno uklanjanje malih molekula, tri do pet ciklusa pranja odgovarajućom MWCO ultrafiltracijskom cijevom obično se postiže smanjenje zagađivača od devetnaest posto ili više. U slučaju da se u slučaju izloženosti u skladu s člankom 3. stavkom 2. točkom (a) primjene ne bi trebalo provoditi, za određene vrste proizvoda, potrebno je utvrditi razinu i razinu izloženosti.

Proizvodnja virusnih čestica i nanočestica

Viralni vektori, čestice nalik virusu i inženjerske nanočestice zahtijevaju specijalizirana MWCO razmatranja jer njihova učinkovita molekularna težina često premašuje gornji raspon standardnih ultrafiltracijskih cijevi. Adeno-associirani virusi s molekularnom težinom od tri do pet megatona zahtijevaju ultrafiltracijske tube membrane s MWCO vrijednostima od stotinu kilodaltona ili više kako bi se postigla zadržavanje. Veće virusne čestice kao što su lentivirusi ili adenovirusi mogu zahtijevati membrane koje se približavaju granici između ultrafiltracije i mikrofiltracije, s MWCO specifikacijama od tri stotine kilodaltona do tisuću kilodaltona.

U slučaju da se primjenjuje metoda za izračun koncentracije nanodjeljaka, u skladu s člankom 6. stavkom 2. točkom (a) ovog Pravilnika, u slučaju da se primjenjuje metoda za izračun koncentracije nanodjeljaka, u skladu s člankom 6. stavkom 2. točkom (a) ovog Pravilnika, u slučaju da se Nanodjelci obloženi proteinima, lipidni nanodjelci i konjugati polimera i lijekova mogu pokazati ponašanje zadržavanja koje se razlikuje od predviđanja temeljenih isključivo na veličini čestica zbog djelovanja kemije površine. Cilj ovih primjena je obično koncentrirati čestice dok uklanjate slobodni protein, višak stabilizatora ili nereagirane reagente. U slučaju da se ne primjenjuje primjena ovog standarda, potrebno je utvrditi primjenu za određene vrste.

Odgovaranje na probleme u odabiru MWCO-a i optimizacija performansi

Dijagnoza neočekivanog gubitka molekula cilja

Ako se čini da ultrafiltracijska cijev gubi ciljanu moleku kroz membranu unatoč tome što je odabrala MWCO znatno ispod teorijske molekularne mase, za to može biti odgovorno nekoliko čimbenika. Agregacija ili razgradnja proteina može stvoriti manje fragmente koji prolaze kroz membranu, osobito ako je uzorak bio podvrgnut ciklusima smrzavanja i odmrzavanja, dugotrajnom skladištenju ili teškim uvjetima pročišćavanja. U slučaju da se primjenjuje primjena ovog standarda, u slučaju primjene ovog standarda, primjenjuje se metoda za utvrđivanje vrijednosti.

U slučaju da se ne primjenjuje primjena ovog standarda, ispitivanje se provodi u skladu s člankom 3. stavkom 2. U slučaju da se ne primjenjuje primjena ovog standarda, testiranje se može provesti na temelju ispitivanja. Ako se gubitak nastavlja unatoč tim mjerama, može biti potrebno ispitivanje ultrafiltracijske cijevi s nižim MWCO-om, čak i ako krši standardno pravilo jedne trećine. Neki proteini s neobičnim oblicima ili velikom fleksibilnošću zahtijevaju konzervativniju selekciju MWCO-a nego što bi globularni standardi proteina sugerirali.

Svrha postupka

Polako filtriranje kroz ultrafiltracijsku cijev ukazuje na prljavštinu membrane, prekomjernu viskoznost uzorka ili izbor MWCO-a koji je previše ograničavajući za sastav uzorka. Kompleksni uzorci koji sadrže lipide, nukleinske kiseline ili čestice mogu zamašiti pore membrane i dramatično smanjiti brzinu protoka kako koncentracija raste. Ako se uzorak ne može upotrijebiti za ispitivanje, potrebno je uzeti u obzir i sljedeće: U slučaju da se primjenjuje metoda za utvrđivanje koncentracije, u slučaju primjene metode za utvrđivanje koncentracije, treba se uzeti u obzir i procjena koncentracije.

Ako se nakon prethodne obrade uzorka nastavi spor filtriranje, testiranje ultrafiltracijske cijevi s većim MWCO-om može poboljšati brzinu obrade, a istovremeno osigurati odgovarajuću zadržavanje. Odnos između MWCO-a i brzine protoka nije linearan, a povećanje od tri kilodaltona na deset kilodaltona membrane može znatno poboljšati brzinu filtracije s minimalnim utjecajem na zadržavanje za proteine iznad trideset kilodaltona. Temperatura također utječe na brzinu filtracije, pri čemu obrada na sobnoj temperaturi obično pruža brži protok nego rad u hladnoj sobi zbog smanjene viskoznosti. Međutim, odabir temperature mora uravnotežiti brzinu obrade s zahtjevima stabilnosti proteina za vaš specifični ciljni molekul.

Upravljanje učincima polarizacije koncentracije

Polarizacija koncentracije nastaje kada se zadržani molekuli nakupljaju na površini membrane ultrafiltracijske cijevi, stvarajući lokaliziran sloj visoke koncentracije koji smanjuje veličinu pore i usporava filtraciju. Ova pojava postaje izraženija s povećanjem koncentracije i može dovesti do očitih promjena u karakteristikama zadržavanja tijekom obrade. U slučaju da se ne provede primjena, testiranje se provodi na temelju podataka iz članka 4. stavka 2. točke (a) Uredbe (EZ) br. 1907/2006 i na temelju podataka iz članka 4. stavka 2. točke (a) Uredbe (EZ) br. 1907/2006 i na temelju podataka iz članka 4. stavka 2. točke (b) Uredbe (EZ) br. 1907/2006 i Međutim, prekomjerno uznemiravanje može uzrokovati pjenu ili denaturaciju proteina za osjetljive molekule.

Brzina centrifugiranja koja se koristi s ultrafiltracijskom cijevom utječe na ravnotežu između brzine filtracije i polarizacije koncentracije. Veće centrifužne sile povećavaju brzinu protoka, ali također stiskaju polarizacijski sloj čvršće protiv membrane, potencijalno smanjujući ukupnu učinkovitost. Većina ultrafiltracijskih cijevi propisuje brzinu centrifugiranja između tri tisuće i sedam tisuća puta gravitacije, s optimalnom brzinom ovisno o viskoznosti uzorka, koncentraciji proteina i MWCO. Ako polarizacija koncentracije značajno utječe na vaš proces, rad na nižim faktorima koncentracije, obrada manjih zapremina uzoraka ili korištenje ultrafiltracijske cijevi s većom površinom membrane može poboljšati rezultate bez potrebe za modifikacijom MWCO-a.

Napredne razmatranja za specijalizirane primjene

Rad s tamponima koji nisu kompatibilni s membranom

U slučaju da se ne primjenjuje, potrebno je uzeti u obzir i druge elemente. Snažne kiseline, baze, organski rastvarači i oksidanti mogu oštetiti regenerirane celulozne membrane, dok polietersulfonske membrane pružaju veću kemijsku otpornost, ali mogu pod određenim uvjetima pokazati povećanu vezu s proteinima. Ako je primjena zahtjeva za tampone koji sadrže značajne koncentracije organskih rastvarača, deterdženta ili ekstremne vrijednosti pH-a, odabir ultrafiltracijske cijevi s odgovarajućom kemijom membrane jednako je važan kao i odabir ispravnog MWCO-a.

U slučaju da se u skladu s člankom 3. točkom (a) ovog članka primjenjuje jedna od sljedećih metoda: Visoke koncentracije kaootropnih agensa kao što su ureja ili guanidinijum hlorid uzrokuju otekline membrane koje mogu povećati djelotvornu MWCO, što potencijalno omogućuje gubitak ciljanog molekula. Nasuprot tome, neke komponente tampona uzrokuju kontrakciju membrane koja smanjuje veličinu efektivnih pora i može usporiti brzinu filtracije. U slučaju da se ne radi s nestandardnim tamponima, pregledavanje karata kompatibilnosti proizvođača i provođenje malih ispitivanja zadržavanja s vašim specifičnim sastavom tampona osigurava da odabrani MWCO radi kako se očekuje u stvarnim uvjetima rada.

Razmatranja o razmjerima od istraživanja do proizvodnje

U skladu s člankom 3. stavkom 1. točkom (a) Uredbe (EZ) br. 765/2008 Komisija je odlučila da se za proizvodnju ultrafiltracijskih cijevi za istraživanje u malom obimu primjenjuje sljedeći postupak: U skladu s člankom 3. stavkom 2. točkom (a) ovog članka, za proizvodnju membrana za proizvodnju električne energije u skladu s člankom 3. stavkom 3. točkom (a) ovog članka, za proizvodnju električne energije u skladu s člankom 3. točkom (a) ovog članka, primjenjuje se sljedeći postupak: Prilikom povećanja, održavanje iste kemije membrane i proizvođača osigurava dosljedno ponašanje zadržavanja. Međutim, veća površina membrane i različite geometrije uređaja mogu utjecati na polarizaciju koncentracije, vrijeme obrade i optimalne uvjete centrifugiranja.

Proces ultrafiltracije u proizvodnom razmjeru obično koristi pomiješane ćelije ili sustave tangencijalne filtracije protoka umjesto centrifugnih ultrafiltracijskih cijevi, ali načela odabira MWCO-a ostaju dosljedna u svim formatima. Ustanovi u tangencijalnim sustavima protoka smanjuju polarizaciju koncentracije u usporedbi s filtriranjem u centrifugalnim uređajima, što potencijalno omogućuje korištenje vrijednosti MWCO bliže molekularnoj masi ciljnog molekula. U skladu s člankom 3. stavkom 1. U skladu s člankom 3. stavkom 1. stavkom 2. točkom (a) Uredbe (EZ) br. 765/2008 Komisija je odlučila da se za razdoblje od 1. siječnja 2017. do 31. prosinca 2017.

Kontrola kvalitete i dosljednost od serije do serije

U slučaju da se ne provede ispitivanje, potrebno je osigurati da se ne smanji količina vode u vodovodu. Membrane se mogu s vremenom razgraditi ako su izložene ekstremnim temperaturama, vlažnosti ili kontaminaciji, što potencijalno mijenja MWCO karakteristike. Upotreba ultrafiltracijskih cijevi iz jedne proizvodne serije za kritične primjene minimizira varijabilnost od serije do serije razlika u proizvodnji membrane. Uređaji za skladištenje u zapečaćenim ambalažama pri kontroliranoj temperaturi i vlažnosti očuvaju funkcije membrane do uporabe.

Uvođenje protokola za provjeru zadržavanja osigurava da ultrafiltracijska cijev nastavi raditi u skladu s specifikacijama. U slučaju da se u skladu s člankom 6. stavkom 1. točkom (a) ovog članka primjenjuje na proizvod, proizvođač mora upotrijebiti odgovarajuće metode za utvrđivanje vrijednosti. U slučaju da se primjenjuje primjena ovog standarda, testiranje se provodi na temelju podataka iz članka 4. stavka 2. U skladu s člankom 3. stavkom 2. točkom (a) Uredbe (EZ) br. 1907/2006, u skladu s člankom 3. stavkom 3. točkom (b) Uredbe (EZ) br. 1907/2006, u skladu s člankom 4. točkom (c) Uredbe (EZ) br. 1907/2006, u skladu s člankom 4. točkom (c) Uredbe (EZ)

Često se javljaju pitanja

Što se događa ako izaberem MWCO koji je previše blizu molekularne mase mog ciljnog proteina?

Ako se ultrafiltracijska cijev MWCO odabere previše blizu molekularne mase ciljanog proteina, obično se uzrokuje djelomični gubitak proteina kroz membranu, što smanjuje ukupni prinos oporavka. U slučaju da se ne primjenjuje primjena ovog standarda, testiranje se provodi na temelju podataka iz članka 4. stavka 2. točke (a) Uredbe (EZ) br. 1907/2006 i u skladu s člankom 4. stavkom 2. Osim toga, proteini s proširenim konformacijama ili fleksibilnošću mogu lakše prolaziti kroz pore nego što sugerišu globularni standardi proteina koji se koriste za definiranje MWCO-a. Za osiguravanje pouzdane zadržavanja i visoke oporabe, odaberite MWCO koji je trećina do polovice molekularne mase ciljanog proteina, stvarajući odgovarajuću sigurnosnu maržu za promjenjivost oblika i tolerancije specifikacije MWCO.

Mogu li koristiti istu ultrafiltracijsku cijev MWCO za uzorke DNK i proteina slične molekularne težine?

DNK i proteini jednake molekularne težine zahtijevaju različite MWCO selekcije jer se njihova fizička konformacija i hidrodinamski radiji znatno razlikuju. Nukleinske kiseline usvajaju proširene linearne ili dvostruke spiralne strukture koje stvaraju veće učinkovite veličine u usporedbi s kompaktnim kuglatnim proteinima. U slučaju da se primjenjuje metoda za ispitivanje, ispitivanje se provodi u skladu s člankom 6. stavkom 2. U slučaju da se ne primjenjuje primjena ovog članka, za određene vrste proteina treba se upotrijebiti metoda za izračun vrijednosti. U slučaju da se primjenjuje primjena ovog standarda, ispitni postupak može se provesti na temelju primjene ovog standarda.

Kako utvrditi je li sporost membrane ili nepravilna MWCO uzrok sporog filtriranja?

Za razliku između membranske onečišćenja i neprikladnog izbora MWCO-a potrebna je sustavna procjena performansi ultrafiltracijske cijevi. Ako se filtracija započinje razumnom brzinom, ali se dramatično usporava s napredovanjem koncentracije, vjerojatno je uzrok prljavština membrane od sastavnih dijelova uzorka. Ako se uzorak prečišćava centrifugiranjem ili pomoću grubijeg filtera, može se potvrditi da je problem u prljavštini ako se ovim koracima vrati normalna protok. U slučaju da se u slučaju izlaganja uzorka za uzorak primjenjuje metoda za filtriranje, potrebno je utvrditi razinu i razinu uzorka. U slučaju da se u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju izloženosti u slučaju

Treba li mi prilagoditi izbor MWCO-a pri radu s različitim koncentracijama proteina?

Optimalna cijev za ultrafiltraciju MWCO ostaje konstantna u različitim koncentracijama proteina za određeni ciljni molekul, ali ponašanje obrade može se mijenjati s povećanjem koncentracije. U vrlo visokim koncentracijama proteina, povećana viskoznost i polarizacija koncentracije mogu usporiti brzinu filtracije bez obzira na izbor MWCO-a. U slučaju da se primjenjuje metoda za utvrđivanje koncentracije, u slučaju primjene metode za utvrđivanje koncentracije, treba se uzeti u obzir i to da se ne može utvrditi ni jedna od sljedećih metoda: Ako se na visokim koncentracijama javljaju poteškoće pri obradi, prikladnije je riješiti viskoznost razblaženjem uzorka ili poboljšanim mešanjem nego promjenom MWCO-a. U slučaju da se primjenjuje primjena ovog standarda, u slučaju primjene ovog standarda, primjenjuje se i primjena standarda za određivanje vrijednosti za određenu količinu.